作者：寵物醫(yī)師網(wǎng)

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一、摘要

獸醫(yī)診所每天都會多次采集用血液樣本進行血液學(xué)分析，臨床醫(yī)生應(yīng)該了解可能影響最終結(jié)果的各種因素。

二、引言

在獸醫(yī)診所中，正確解讀血液學(xué)數(shù)據(jù)至關(guān)重要，結(jié)果必須反映患寵的實際情況，從而幫助準(zhǔn)確診斷和制定合適的治療方案。為了確保血液學(xué)分析結(jié)果的可靠性，必須注意幾個關(guān)鍵方面。這些方面包括：血液分析儀的質(zhì)量、識別如分析前、分析中和分析后的錯誤根源，以及對血涂片的解讀。

本篇文章采用問答形式，旨在討論在犬類患寵血液學(xué)檢測及結(jié)果解讀中常見的問題與陷阱。

2.1 脂血癥和溶血如何影響血液學(xué)結(jié)果？

脂血癥（見圖1）會增加樣本的渾濁度，進而干擾血紅蛋白濃度的測定。此外，根據(jù)分析儀的操作系統(tǒng)（阻抗法或激光束法），脂質(zhì)微滴可能導(dǎo)致血小板計數(shù)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）和總白細(xì)胞計數(shù)的錯誤增高1,2。

脂血癥最常見的原因之一是未進行禁食。為了減少這一干擾，應(yīng)在患寵禁食12小時后采集樣本。

圖 1. Sysmex? XN分析儀的散點圖顯示了脂血癥干擾（箭頭指示）對白細(xì)胞分類（WDF）（a）和白細(xì)胞計數(shù)及有核紅細(xì)胞（WNR）（b）的影響。注意脂血癥如何干擾WDF通道中中性粒細(xì)胞和有核紅細(xì)胞的正確分辨，以及在WNR通道中紅細(xì)胞和白細(xì)胞的分辨（SFL = 側(cè)向熒光光，SSL = 側(cè)向散射光，F(xiàn)SL = 前向散射光）。

激光血液學(xué)分析儀可以測量紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白濃度（包括細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白和血漿中的游離血紅蛋白）以及平均紅細(xì)胞體積（MCV）。

如果樣本發(fā)生溶血，MCHC可能升高，而紅細(xì)胞計數(shù)和紅細(xì)胞壓積（HCT）通常低于正常值3。

MCHC是最重要的紅細(xì)胞參數(shù)之一，高于參考范圍通常表明血漿著色出現(xiàn)錯誤或誤讀（如溶血、脂血癥）或紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變（如球形紅細(xì)胞、心形紅細(xì)胞或海因茨小體）。因此，每當(dāng)觀察到高MCHC時，必須評估血漿樣本及紅細(xì)胞形態(tài)（見圖2）。

某些激光分析儀能夠測定細(xì)胞血紅蛋白濃度均值（CHCM）。這一數(shù)值是直接從紅細(xì)胞中計算的，而非像MCHC那樣從紅細(xì)胞計數(shù)和血紅蛋白濃度計算得出。CHCM與MCHC之間的差異通常表明這些參數(shù)存在干擾，最常見的原因是樣本中存在游離血紅蛋白，這通常源自血管內(nèi)溶血或采血后的溶血4,5。

圖 2. 一只犬因洋蔥中毒導(dǎo)致心形紅細(xì)胞（箭頭所指）形成的血涂片。

2.2 在解釋血液學(xué)值時，我是否需要考慮犬的品種？

是的,需要考慮犬的品種。

騎士查爾斯王小獵犬由于β-1微管蛋白基因的突變，存在生理性巨血小板減少癥6。分析儀在計算血小板比積（血小板所占的體積）時會檢測到這些巨血小板；這一點很重要，因為血小板比積比實際的血小板計數(shù)更能反映血小板數(shù)量是否充足7。如果懷疑存在這一突變，需要通過分子檢測進行最終確認(rèn)。

一些東方犬種（如秋田犬、沙皮犬和柴犬）可能表現(xiàn)出生理性小紅細(xì)胞增多癥（紅細(xì)胞比正常?。?/strong>，并且網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白值低于其他品種的參考范圍8。

貴賓犬的紅細(xì)胞平均體積通常更大。

靈緹犬通常具有較高的生理性紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞計數(shù)和血紅蛋白濃度，同時血小板計數(shù)較低，輕度白細(xì)胞減少9。

因此，在解讀動物的血液學(xué)結(jié)果時，必須始終考慮物種、年齡和品種。了解臨床上常見的犬種的變異非常重要。

2.3 我可以使用肝素或檸檬酸鹽采血管進行血液學(xué)分析嗎？

在犬的血液學(xué)分析中，通常需要使用含有EDTA的全血作為抗凝劑，但在獸醫(yī)醫(yī)學(xué)中也可以使用其他抗凝劑，如肝素或檸檬酸，錯誤的抗凝劑使用可能導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。

肝素化的全血不應(yīng)用于細(xì)胞計數(shù)，因為血小板和白細(xì)胞在這樣的樣本中常常發(fā)生聚集。肝素抗凝劑主要用于獲取血漿進行生化檢測，而檸檬酸化的全血則主要用于凝血檢測，以及獲取血漿或進行粘彈性測試。

然而，當(dāng)EDTA樣本中出現(xiàn)血小板和/或白細(xì)胞聚集時，使用加入檸檬酸鈉作為抗凝劑的血液樣本進行細(xì)胞計數(shù)。使用含3.2%液體檸檬酸鈉的檸檬酸試管時，檸檬酸與血液的比例必須精確為1:9。因此，加入檸檬酸鈉作為抗凝劑的血液樣本總是會出現(xiàn)輕微的血液稀釋現(xiàn)象，在血液分析儀提供的值中必須考慮到這一點10。

EDTA是進行血液學(xué)檢測時首選的抗凝劑。在人類醫(yī)學(xué)中，建議取樣時管內(nèi)血液量應(yīng)在制造商推薦體積的10%以內(nèi)。如果血液量不足或過多，都可能影響血液學(xué)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

過多的EDTA會導(dǎo)致紅細(xì)胞的刺狀變形并使其體積減小，從而導(dǎo)致微紅細(xì)胞壓積（microhematocrit）和平均紅細(xì)胞體積（MCV）出現(xiàn)假性降低10。

2.4 血液學(xué)分析儀的質(zhì)量控制有多重要？

在使用血液學(xué)分析儀時，質(zhì)量控制至關(guān)重要。美國獸醫(yī)臨床病理學(xué)會（ASVCP）已發(fā)布多項指南，旨在改善獸醫(yī)血液學(xué)中的質(zhì)量控制，并采取措施防止分析前、分析中和分析后的錯誤11,12,13,14。必須遵循質(zhì)量控制程序，并使用對照樣本進行檢測。此外，參與外部、區(qū)域性和/或國際質(zhì)量控制項目也是必要的。

2.5 手動紅細(xì)胞壓積值與分析儀結(jié)果的比較

自動化血液學(xué)分析儀通過紅細(xì)胞計數(shù)和平均紅細(xì)胞體積（MCV）來計算紅細(xì)胞壓積（HCT）。然而，手動微血細(xì)胞壓積法是最準(zhǔn)確且可重復(fù)的方法，通過高速離心樣本并使用標(biāo)尺讀取毛細(xì)管中的血液（見圖3）。然而，最近一項針對獸醫(yī)學(xué)學(xué)生和獸醫(yī)的研究發(fā)現(xiàn)，25%的人在填充管子前沒有充分混勻血液，23%的人錯誤地讀取了結(jié)果，91%的人未按照世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的方式填充微血細(xì)胞壓積管15,16。

為了減少需要手動微血細(xì)胞壓積測定的樣本數(shù)量，建議研究血紅蛋白濃度與紅細(xì)胞壓積值之間的關(guān)系。通常，遵循“3的法則”，即紅細(xì)胞壓積值大約是血紅蛋白濃度的3倍。如果紅細(xì)胞壓積值超出了這一范圍，建議進行手動微血細(xì)胞壓積測定，并將結(jié)果與分析儀提供的MCV和MCHC值一起納入血液學(xué)分析中10。

此外，值得一提的是，高鈉血癥可能會改變自動分析儀獲得的紅細(xì)胞壓積值。患有高鈉血癥的動物在與分析儀稀釋液混合時，其紅細(xì)胞可能會膨脹，導(dǎo)致MCV和紅細(xì)胞壓積（HCT）假性升高17。

圖 3. 盡管自動化分析儀通常能夠提供令人滿意的值，手動方法被認(rèn)為能夠提供最準(zhǔn)確的紅細(xì)胞壓積結(jié)果。

2.6 血液學(xué)分析儀是否能夠可靠地識別左移或毒性改變？

美國獸醫(yī)臨床病理學(xué)會（ASVCP）已經(jīng)建立了關(guān)于顯微鏡下血涂片檢查以及確認(rèn)自動化白細(xì)胞分類計數(shù)的建議14。

獸醫(yī)專家對于血液涂片的評估意見各不相同：有些專家建議所有樣本都應(yīng)包括血涂片檢查，而其他專家則建議僅在特定標(biāo)準(zhǔn)條件下對血涂片進行檢查和/或進行白細(xì)胞手動分類。不同方法的適用性取決于患寵群體和臨床背景（例如病重患寵、麻醉前檢查或老年檢查）、可用的血液學(xué)分析儀以及實驗室人員的知識水平。

激光血液學(xué)分析儀除了提供數(shù)值結(jié)果外，還能提供結(jié)果的圖形展示（細(xì)胞圖）。多項獸醫(yī)學(xué)研究表明，細(xì)胞圖在決策是否需要復(fù)查血涂片時非常有用18,19?；谶@些信息，合理的建議是在以下情況下對血涂片進行檢查：

1. 獲得異常細(xì)胞圖；

2. 分析儀標(biāo)記白細(xì)胞分類中可能出現(xiàn)的故障或錯誤；

3. 白細(xì)胞計數(shù)超出參考范圍。

自動激光血液學(xué)分析儀可以提示存在毒性改變或左移（見圖4）；然而，關(guān)于這一發(fā)現(xiàn)的敏感性和特異性的信息非常有限，因此，對于病重或白細(xì)胞增多的動物，或者當(dāng)分析儀發(fā)出警報時，始終應(yīng)復(fù)查血涂片（見圖5）。

圖 4. 使用Sysmex? XN分析儀獲得的兩只犬的白細(xì)胞分類散點圖；正常犬（a）與白細(xì)胞增多和左移的犬（b）進行比較。請注意，與健康犬相比，第二只犬的中性粒細(xì)胞群體定位和分布發(fā)生了變化，并且淋巴細(xì)胞與中性粒細(xì)胞的分離不清。這為臨床醫(yī)生發(fā)出警告，提示需要手動評估血涂片。（SFL = 側(cè)向熒光光，SSL = 側(cè)向散射光）

圖 5. 雖然自動分析儀可以提供有關(guān)動物血液學(xué)狀態(tài)的寶貴信息，但對于任何嚴(yán)重不適的患寵也應(yīng)該評估血涂片。

2.7 自體凝集或寄生蟲會干擾血液分析儀嗎？

血液樣本中的宏觀或微觀自身凝集（圖 6）提示存在免疫介導(dǎo)的過程；若發(fā)現(xiàn)自聚集，應(yīng)使用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞并重新進行測試20。如果自聚集現(xiàn)象屬實，在分析儀的細(xì)胞圖中可以觀察到聚集體，且這些聚集體會被誤認(rèn)為單一細(xì)胞，從而導(dǎo)致紅細(xì)胞計數(shù)人為偏低2。

研究表明，巴貝蟲屬等血液寄生蟲（圖 7）的存在會引起紅細(xì)胞細(xì)胞圖的變化，并可能導(dǎo)致網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的錯誤增高。這是因為激光血液學(xué)分析儀使用了熒光聚甲烯染料，而存在于紅細(xì)胞中的寄生蟲也會被染色21,22。然而，這種情況較為罕見，且這些分析儀在檢測血液寄生蟲的敏感性尚不明確，因此，目前建議在存在可疑情況時評估血涂片，或在來自巴貝斯蟲病或其他媒介傳播疾病流行地區(qū)的動物中常規(guī)進行血涂片檢查23,24。

圖 6. 患有免疫介導(dǎo)的溶血性貧血的犬的宏觀 (a) 和微觀 (b) 自身凝集。

圖 7. 犬的血涂片顯示存在犬巴貝斯蟲寄生蟲。

2.8 血液分析儀上的血小板減少癥是否需要通過血涂片來確診？

每當(dāng)發(fā)現(xiàn)血小板計數(shù)下降時，都應(yīng)進行血涂片檢查——獸醫(yī)臨床中，樣本運輸或采血過程中的造成的誤讀很常見。

通過血涂片可以估算血小板數(shù)量，方法是將1000×油鏡下每個視野中血小板的平均數(shù)量乘以15000/μL。然而，一項研究表明，使用這種方法估算犬的血小板計數(shù)的變異性非常高，且結(jié)果受到操作人員和所評估血涂片區(qū)域的影響25。

對于大多數(shù)血液學(xué)樣本，因血小板聚集造成的血小板計數(shù)失真通常令人沮喪，但對于大多數(shù)情況可能并不必要進行重新驗證。

根據(jù)臨床推薦，如果血小板計數(shù)在參考范圍內(nèi)，則血小板聚集通常無臨床意義。然而，每當(dāng)自動化計數(shù)顯示血小板減少時，都應(yīng)對血涂片進行復(fù)查，評估是否存在血小板聚集（見圖8）26。

新型激光血液學(xué)分析儀已配備血小板聚集指示器，根據(jù)聚集體的數(shù)量和大小，臨床醫(yī)生可能能夠在分析儀提供的細(xì)胞圖和直方圖中檢測其存在。這有助于在明顯定義的病例中減少對血涂片的檢查需求。

值得注意的是，最近的一篇文章評估了使用商業(yè)分析儀測定犬的未成熟血小板分?jǐn)?shù)（IPF）。這些未成熟細(xì)胞是骨髓在血小板需求增加時再生的指示。研究報告指出，在存在血小板聚集的情況下，分析儀提供的IPF值略有高估27。

圖 8. 帶有血小板聚集的犬的血涂片。

三、參考文獻(xiàn)

1. Zandecki M, Genevieve F, Gerard J, et al. Spurious counts and spurious results on haematology analysers: a review. Part I: platelets. Int. J. Lab. Hematol. 2007;29(1):4-20.

2. Zandecki M, Genevieve F, Gerard J, et al. Spurious counts and spurious results on haematology analysers: a review. Part II: white blood cells, red blood cells, haemoglobin, red cell indices and reticulocytes. Int. J. Lab. Hematol. 2007;29(1):21-41.

3. Berda-Haddad Y, Faure C, Boubaya M, et al. Increased mean corpuscular haemoglobin concentration: artefact or pathological condition? Int. J. Lab. Hematol. 2017;39(1):32-41.

4. Stockham SL, Scott MA. Fundamentals of Veterinary Clinical Pathology, 2nd ed. Ames, Iowa: Blackwell, 2008. p120-122

5. Stokol T, Erb HN. A comparison of platelet parameters in EDTA‐ and citrate‐anticoagulated blood in dogs. Vet. Clin. Pathol. 2007;36:148-154.

6. Davis B, Toivio-Kinnucan M, Schuller S, et al. Mutation in beta1-tubulin correlates with macrothrombocytopenia in Cavalier King Charles Spaniels. J. Vet. Intern. Med. 2008;22(3):540-545.

7. Tvedten HW, Lillieh??k IE, Oberg J, et al. Validation of Advia plateletcrit for assessing platelet mass in dogs, including Cavalier King Charles spaniels. Vet. Clin. Pathol. 2012;41(3):336-343.

8. Schaefer DM, Stokol T. The utility of reticulocyte indices in distinguishing iron deficiency anemia from anemia of inflammatory disease, portosystemic shunting, and breed-associated microcytosis in dogs. Vet. Clin. Pathol. 2015;44(1):109-119.

9. Zaldívar-López S, Marín LM, Iazbik MC, et al. Clinical pathology of Greyhounds and other sighthounds. Vet. Clin. Pathol. 2011;40(4):414-425.

10.Harvey JW. Veterinary Hematology: A Diagnostic Guide and Color Atlas. St. Louis, MO: Elsevier/Saunders, 2012. p17-19

11. Arnold JE, Camus MS, Freeman KP, et al. ASVCP Guidelines: Principles of Quality Assurance and Standards for Veterinary Clinical Pathology (version 3.0). Vet. Clin. Pathol. 2019;48(4):542-618.

12. Flatland B, Freeman KP, Friedrichs KR, et al. ASVCP quality assurance guidelines: control of general analytical factors in veterinary laboratories. Vet. Clin. Pathol. 2010;39(3):264-277.

13. Camus MS, Flatland B, Freeman KP, et al. ASVCP quality assurance guidelines: external quality assessment and comparative testing for reference and in-clinic laboratories. Vet. Clin. Pathol. 2015;44(4):477-492.

14. Vap LM, Harr KE, Arnold JE, et al; ASVCP quality assurance guidelines: control of preanalytical and analytical factors for hematology for mammalian and nonmammalian species, hemostasis, and crossmatching in veterinary laboratories. Vet. Clin. Pathol. 2012;41(1):8-17.

15.Breheny CR, Brown A, Handel I, et al. Inter- and intra-operator variability in the analysis of packed cell volume. J. Small Anim. Pract. 2017;58(1):29-34.

16. World Health Organization Diagnostic Imaging and Laboratory Technology. Recommended method for the determination of packed cell volume by centrifugation. World Health Organization, Geneva, 2000

17.Boisvert AM, Tvedten HW, Scott MA. Artifactual effects of hypernatremia and hyponatremia on red cell analytes measured by the Bayer H*1 analyzer. Vet. Clin. Pathol. 1999;28(3):91-96.

18.Lilliehook I, Tvedten H. Validation of the Sysmex XT‐2000iV hematology system for dogs, cats, and horses. II. Differential leukocyte counts. Vet. Clin. Pathol. 2009;38:175-182.

19. Stirn M, Moritz A, Bauer N. Rate of manual leukocyte differentials in dog, cat and horse blood samples using ADVIA 120 cytograms. BMC Vet. Res. 2014;10:125.

20. Garden OA, Kidd L, Mexas AM, et al. ACVIM consensus statement on the diagnosis of immune-mediated hemolytic anemia in dogs and cats. J. Vet. Intern. Med. 2019;33(2):313-334.

21. Piane L, Théron ML, Aumann M, et al. Spurious reticulocyte profiles in a dog with babesiosis. Vet. Clin. Pathol. 2016;45(4):594-597. Doi: 10.1111/vcp.12395.

22. Piane L, Young KM, Giraud L, et al. Spurious reticulocyte profiles in dogs with large form babesiosis: a retrospective study. Vet. Clin. Pathol. 2016;45(4):598-603. Doi: 10.1111/vcp.12396.

23. Bauer N, Nakagawa J, Dunker C, et al. Evaluation of the automated hematology analyzer Sysmex XT-2000iV? compared to the ADVIA? 2120 for its use in dogs, cats, and horses: Part I – Precision, linearity, and accuracy of complete blood cell count. J. Vet. Diagn. Invest. 2011;23(6):1168-1180.

24. Bauer N, Nakagawa J, Dunker C, et al. Evaluation of the automated hematology analyzer Sysmex XT-2000iV? compared to the ADVIA? 2120 for its use in dogs, cats, and horses. Part II – Accuracy of leukocyte differential and reticulocyte count, impact of anticoagulant and sample aging. J. Vet. Diagn. Invest. 2012;24(1):74-89.

25. Paltrinieri S, Paciletti V, Zambarbieri J. Analytical variability of estimated platelet counts on canine blood smears. Vet. Clin. Pathol. 2018;47:197-204.

26. Tvedten HW, Backlund K, Lilliehook IE. Reducing error in feline platelet enumeration by addition of Iloprost to blood specimens: comparison to prostaglandin E1 and EDTA. Vet. Clin. Pathol. 2015;44:179-187.

27. Jornet-Rius O, Mesalles-Naranjo M, Pastor J. Performance of the Sysmex XN-V hematology analyzer in determining the immature platelet fraction in dogs: A preliminary study and reference values. Vet. Clin. Pathol. 2023;52(3):433-442.

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翻譯|張帆 張秋雁

編輯|張秋雁

審核|郭羽麗