好書推薦!《斑馬魚行為實驗手冊》電子版pdf,網盤發貨
斑馬魚游泳行為測試(swim behavior assay)主要用于在脊髓損傷或其他神經系統損傷后的恢復過程中監測斑馬魚游泳行為的變化,以評估損傷后的恢復情況和治療效果。分析斑馬魚在不同環境條件下的行為模式,了解其行為特征和可能的行為機制。研究斑馬魚游泳時肌肉的協調性,以及神經系統如何控制這些肌肉的協調運動。
實驗設備:使用5升的游泳隧道裝置。
實驗準備:斑馬魚在無流動的密閉隧道中適應5分鐘。
通過觀察斑馬魚在不同流速下的游泳行為,評估它們的運動能力和耐力。
實驗步驟:
每組5條斑馬魚,在5升的游泳隧道裝置中。每組斑馬魚在接近零到低流速的條件下總共游泳15分鐘(0厘米/秒5分鐘,10厘米/秒5分鐘,以及15厘米/秒5分鐘)。整個游泳過程使用高速攝像機記錄,設置如下:寬高比1:4;像素時鐘344;幀率70幀/秒;曝光時間0.29秒;光圈1.4至2;最大幀數63,000。錄像被轉換為每秒20幀,對于每一幀,識別出大于1500像素平方的動物/物體,并為每個動物/物體導出XY坐標。分析0、10和15厘米/秒的流速下游泳的距離。以9厘米/秒和10厘米/秒的速度游泳5分鐘,評估魚在最低速度下的游泳能力。每兩分鐘增加水流速度,直到魚達到疲勞極限。記錄每條魚疲勞時的游泳時間。
優化斑馬魚游泳耐力測試條件:
確保測試環境的溫度適宜,通常斑馬魚的適宜水溫為26-28°C。水溫對斑馬魚的新陳代謝和行為有顯著影響。水溫的不適宜可能導致斑馬魚行為異常。
維持水質的清潔,避免污染物或病原體影響測試結果。
不同年齡和發育階段的斑馬魚可能在游泳能力上存在差異。
根據斑馬魚的品種和健康狀況調整起始和增加的水流速度,確保測試既具有挑戰性又不至于造成過度壓力。水流速度的不適當設置可能導致測試結果不準確,流速過快或過慢都可能影響斑馬魚的游泳表現。
在正式測試前給予斑馬魚足夠的時間適應實驗環境,減少因環境變化引起的壓力。實驗室或測試環境中的噪音和振動可能會干擾斑馬魚的行為。斑馬魚如果沒有足夠的時間適應測試環境,可能會表現出壓力行為,影響游泳表現。
考慮斑馬魚的生理周期,避免在它們的休息期進行測試。
確保斑馬魚在測試前得到充足的營養,處于良好的健康狀況。饑餓或過度喂養的斑馬魚可能表現出不同的游泳行為。生病或受傷的斑馬魚可能無法正常游泳,從而影響測試結果。
確保每次測試的條件保持一致,包括水溫、pH值、溶解氧水平等。水的pH值、溶解氧、氨氮水平和其他化學成分都會影響斑馬魚的健康和行為。光照的強度和周期可能會影響斑馬魚的生物節律和行為。
即使是相同年齡和大小的斑馬魚,它們的個性和行為也可能存在差異。
參考文獻:
Saraswathy, V.M., Zhou, L. & Mokalled, M.H. Single-cell analysis of innate spinal cord regeneration identifies intersecting modes of neuronal repair. Nat Commun 15, 6808 (2024). https://doi.org/10.1038/s41467-024-50628-y
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