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動物模型構建與評估︱大鼠慢性疲勞綜合征相關行為評估

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多功能小鼠固定器,專為復雜實驗流程優化,適配多部位針刺實驗光纖植入經鼻給藥清醒小鼠頭部固定等高精度操作,預留標準化接口與卡槽,確保設備穩定性。針對眼眶取血等特殊需求,用戶可依托主體框架進行個性化DIY改造,拓展實驗邊界。

大鼠慢性疲勞綜合征(chronicfatiguesyndrome,CFS)模型是研究人類慢性疲勞綜合征的重要工具。

將動物輕輕放入游泳容器中,同時啟動計時器開始記錄游泳時間。動物進入水中后,會開始游泳以保持漂浮狀態,觀察動物的游泳行為,確保其正常游泳,沒有異常情況(如溺水、掙扎過度等)發生。在游泳過程中,持續觀察動物的狀態,當動物出現以下力竭表現時,停止計時,記錄力竭時間。動物沉入水底超過10-15秒,且無法自行浮出水面繼續游泳;動物雖然漂浮在水面,但不再有主動游泳動作,僅靠輕微的掙扎或劃水動作維持漂浮狀態,且持續時間超過30-60秒;動物的游泳動作明顯減慢、無力,無法保持正常的游泳姿勢,且多次嘗試后仍無法繼續有效游泳。不同的研究可能對力竭的判斷標準略有差異,但一般應在實驗前明確規定并保持一致。這是力竭游泳實驗最直接的結果指標,反映了動物的運動耐力。力竭時間越長,說明動物的耐力越好;反之,力竭時間越短,則表明動物的耐力較差。力竭時間可以直接用于比較不同組動物之間的運動耐力差異,評估藥物、運動訓練、營養干預等因素對運動耐力的影響。

運動功能相關評價

自主活動監測

采用動物行為活動監測系統(如曠場實驗箱結合視頻跟蹤軟件),曠場實驗箱一般為一個較大的方形或圓形區域(如邊長或直徑為50-100厘米),周圍有一定高度的圍墻,底部劃分成若干小方格。將大鼠輕輕放入曠場實驗箱的中心區域,任其自由活動,視頻跟蹤軟件自動記錄大鼠在一定時間內(如10-30分鐘)的活動情況,包括運動軌跡、速度、在不同區域(如中心區域和周邊區域)的停留時間、活動距離等參數。

正常大鼠在曠場中會表現出一定的探索行為,活動軌跡相對較為復雜,活動距離較長,在中心區域和周邊區域都會有活動。而CFS模型大鼠由于疲勞和體力下降,在曠場實驗中往往表現出自主活動減少,運動軌跡簡單,活動距離縮短,更多地集中在曠場的周邊區域,較少進入中心區域進行探索,這反映了其疲勞程度較高,體力和精力不足,對新環境的探索意愿降低,類似于CFS患者在日常生活中表現出的活動減少、容易疲勞的癥狀。通過自主活動監測可以直觀地觀察到CFS對大鼠行為活力的影響,同時也可以用于評估藥物或其他干預措施對改善疲勞癥狀的效果。

力竭跑臺實驗(exhaustivetreadmilltest)

是一種用于評估實驗動物的耐力水平和疲勞程度的常用實驗方法。這種實驗通過模擬長時間、高強度的運動狀態,觀察實驗動物在體力達到極限時的表現,評估其耐力水平和疲勞程度。“力竭跑臺時間”是實驗動物在跑臺上持續運動直至達到力竭狀態所用時長,與體力狀態成正比。

強迫游泳實驗(再次進行,但目的與建模時不同,用于評估疲勞狀態下的行為表現)。同建模時的強迫游泳實驗裝置(圓柱形容器、水深、水溫等條件相同)。將大鼠放入水中,觀察其在一定時間內(如6-10分鐘)的游泳行為,記錄大鼠的游泳不動時間(即大鼠漂浮在水面上,僅保持頭部露出水面,不做主動游泳動作的時間)、游泳速度、掙扎行為等參數。


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評估指標:在正常情況下,大鼠具有一定的游泳能力和求生欲望,會在水中積極游動。而CFS模型大鼠由于身體和心理疲勞,在強迫游泳實驗中表現出游泳不動時間增加,游泳速度減慢,掙扎行為減少,這表明其耐力和體力明顯下降,更容易放棄掙扎,呈現出疲勞和無力的狀態,與CFS患者的疲勞、缺乏活力的癥狀相符。該實驗可以有效地評估CFS模型大鼠的疲勞程度,同時也可以用于研究藥物或其他干預措施對提高疲勞大鼠耐力和活力的作用機制。

轉輪實驗

使用帶有自動記錄功能的轉輪裝置,轉輪直徑一般為20-30厘米,表面有防滑紋理。將大鼠單獨放置在轉輪上,適應一段時間(如1-2天,每天10-20分鐘)后,進行正式實驗。在實驗過程中,記錄大鼠在一定時間內(如30-60分鐘)的轉輪跑動距離、跑動速度、跑動時間以及休息時間等參數。

評估指標:正常大鼠在轉輪上會主動跑動,表現出一定的運動能力和耐力。CFS模型大鼠由于疲勞,在轉輪實驗中通常表現出跑動距離縮短,跑動速度降低,跑動時間減少,休息時間增加,這反映了其運動耐力和體力的下降,無法維持長時間的運動,與CFS患者在日常活動中容易感到疲勞、難以持續進行體力活動的表現相似。轉輪實驗可以定量評估CFS模型大鼠的運動能力和疲勞程度,對于研究CFS對身體機能的影響以及篩選改善疲勞癥狀的藥物或干預措施具有重要意義。

情緒相關行為評估

高架十字迷宮

由兩條垂直的跑道組成,一條為開放臂(通常無側壁,周圍有一定高度的邊緣防止大鼠掉落),另一條為閉合臂(有側壁包圍),兩條臂的長度和寬度相同,且高于地面一定高度(一般為50-100厘米)。實驗在安靜、光線較暗的環境中進行,將大鼠放置在迷宮中央區域,面對其中一條臂,觀察其在開放臂和閉合臂中的活動情況,持續記錄5-10分鐘,主要觀察指標包括大鼠在開放臂和閉合臂的停留時間、進入次數以及在迷宮中的運動軌跡等。

評估指標:該實驗主要用于評估大鼠的焦慮樣行為。正常大鼠對開放臂具有一定的好奇心,但由于其高度和開放性會產生恐懼,因此會在開放臂和閉合臂之間進行權衡。CFS模型大鼠由于長期處于疲勞和應激狀態,常伴有焦慮情緒,在高架十字迷宮實驗中通常表現出對開放臂的恐懼增加,進入開放臂的次數減少、停留時間縮短,更多地偏好于待在閉合臂中,這表明其焦慮水平升高,與CFS患者中常見的焦慮情緒障礙相符。

偏好實驗

實驗前,對大鼠進行1-2天的蔗糖溶液(如1%-2%蔗糖水)和普通飲用水的適應訓練,讓大鼠熟悉兩種液體的味道和位置。實驗時,同時提供給大鼠兩個裝有液體的瓶子,一個裝蔗糖溶液,一個裝普通飲用水,將瓶子固定在大鼠飼養籠的兩側,位置隨機更換,以避免位置偏好影響實驗結果。觀察并記錄大鼠在24-48小時內對蔗糖溶液和飲用水的攝取量,計算蔗糖偏好指數(蔗糖偏好指數=蔗糖溶液攝取量/(蔗糖溶液攝取量+飲用水攝取量))。蔗糖偏好實驗主要用于評估大鼠的抑郁樣行為,正常大鼠通常會表現出對蔗糖溶液的偏好,攝取較多的蔗糖溶液。而CFS模型大鼠由于長期疲勞、應激以及可能伴隨的抑郁情緒,往往表現出蔗糖偏好指數降低,類似于CFS患者中常見的抑郁癥狀,如興趣減退、快感缺失等。

認知相關行為評估

水迷宮實驗

水迷宮實驗主要包括Morris水迷宮,其裝置為一個圓形水池,直徑一般為100-200厘米,水深通常為30-50厘米,水溫保持在22-25°C左右,水池分為四個象限,其中一個象限放置一個隱藏在水面下一定深度(一般為1-2厘米)的平臺,平臺顏色與水池背景有明顯區別。實驗分為訓練階段和測試階段,在訓練階段,將大鼠放入水池中,讓其尋找平臺,每次訓練時間為60-120秒,如果大鼠在規定時間內找到平臺,允許其在平臺上停留10-30秒;如果未找到平臺,則引導其找到平臺并停留相同時間。每天進行多次訓練,持續數天(如4-7天)。在測試階段,撤去平臺,將大鼠放入水池中,觀察其在一定時間內(如60-120秒)的游泳軌跡,主要評估指標包括大鼠找到平臺原址區域(目標象限)的潛伏期、在目標象限的停留時間和穿越平臺位置的次數等。

水迷宮實驗主要用于評估大鼠的學習記憶能力,CFS患者常伴有認知功能障礙,在CFS模型大鼠中,由于長期疲勞、應激以及可能導致學習記憶能力下降。在水迷宮實驗中表現為找到平臺的潛伏期延長,即在訓練階段需要更長時間才能找到隱藏平臺;在測試階段,在目標象限的停留時間縮短,穿越平臺位置的次數減少,表明其對平臺位置的記憶受損。

新物體識別實驗

實驗在一個方形或圓形的曠場實驗箱(如邊長或直徑為50-100厘米)中進行,實驗分為兩個階段。在熟悉階段,將兩個相同的物體(如兩個形狀、大小相同的塑料積木)放置在曠場實驗箱的兩個對角位置,將大鼠放入箱內,讓其自由探索5-10分鐘,然后將大鼠取出放回飼養籠。在測試階段,經過一定時間間隔(如1-2小時)后,將其中一個熟悉的物體換成一個新的物體(如形狀或顏色不同的塑料玩具),再將大鼠放入曠場實驗箱中,觀察其在5-10分鐘內對新物體和舊物體的探索行為,記錄大鼠探索新物體和舊物體的時間。

新物體識別實驗基于大鼠對新奇物體具有天然的探索好奇心,通過比較大鼠對新物體和舊物體的探索時間來評估其認知能力。正常大鼠在測試階段會花費更多的時間探索新物體,表明其能夠識別并記住舊物體,具有正常的認知功能。而CFS模型大鼠由于可能存在的認知障礙,在新物體識別實驗中可能表現出對新物體和舊物體的探索時間無明顯差異,或者對新物體的探索時間減少,這反映了其識別記憶能力下降,類似于CFS患者在日常生活中可能出現的記憶力減退、注意力不集中等認知問題。該實驗可以簡單、有效地評估CFS模型大鼠的認知功能。

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