選用3-6個(gè)月齡的雄性和雌性野生型AB品系斑馬魚(yú)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所有成年斑馬魚(yú)均在斑馬魚(yú)飼養(yǎng)系統(tǒng)中飼養(yǎng)，光照周期為14小時(shí)/10小時(shí)（明/暗），水的溫度為28.5℃，PH值為7.5、電導(dǎo)率為500μs/cm，并且每天喂食兩次鹽水蝦。

將野生型AB品系斑馬魚(yú)隨機(jī)分為6組，分別為對(duì)照組，視神經(jīng)擠壓損傷后第1、4、7、10、14天組，對(duì)成年斑馬魚(yú)建立視神經(jīng)擠壓損傷模型。成年斑馬魚(yú)在0.02%三卡因溶液中麻醉充分后，放在鋪有潮濕的紙巾的培養(yǎng)皿中，眼睛朝上。將斑馬魚(yú)置于體視顯微鏡下，在去除斑馬魚(yú)眼睛周圍的結(jié)締組織后，眼睛被輕微地拉出眼眶，暴露視神經(jīng)和眼動(dòng)脈。將Dumont5號(hào)鑷小心地放置在視神經(jīng)周圍，在距視神經(jīng)頭0.5mm處夾傷視神經(jīng)10s，避免損傷眼動(dòng)脈及眼球。成功的斑馬魚(yú)視神經(jīng)擠壓損傷模型表現(xiàn)為在透明的視神經(jīng)髓鞘內(nèi)出現(xiàn)了一個(gè)明顯的間隙。隨后，斑馬魚(yú)眼睛被放回眼眶內(nèi)，斑馬魚(yú)被送回魚(yú)缸中進(jìn)行恢復(fù)。

斑馬魚(yú)視神經(jīng)擠壓損傷模型示意圖

斑馬魚(yú)視神經(jīng)損傷評(píng)估：

使用視動(dòng)反應(yīng)和眼動(dòng)反應(yīng)檢測(cè)斑馬魚(yú)視神經(jīng)損傷后視功能恢復(fù)狀況。對(duì)照組成年斑馬魚(yú)有穩(wěn)定的視動(dòng)反應(yīng)，能夠持續(xù)追蹤光柵游動(dòng)。斑馬魚(yú)在視神經(jīng)擠壓損傷后第1天和4天時(shí)，視動(dòng)反應(yīng)嚴(yán)重受損，表現(xiàn)為不再追隨光柵移動(dòng)，而是雜亂無(wú)章地游動(dòng)。隨著時(shí)間的推移，視動(dòng)反應(yīng)逐步恢復(fù)，斑馬魚(yú)在視神經(jīng)擠壓損傷后第10天和第14天時(shí)，視動(dòng)反應(yīng)逐漸恢復(fù)到損傷前水平。

檢測(cè)斑馬魚(yú)視神經(jīng)擠壓損傷后眼動(dòng)反應(yīng)的變化，斑馬魚(yú)在視神經(jīng)損傷后第1天和4天時(shí)無(wú)眼動(dòng)反應(yīng)，而在第7天時(shí)少部分斑馬魚(yú)中可檢測(cè)到眼動(dòng)反應(yīng)，在斑馬魚(yú)視神經(jīng)擠壓損傷后第10天和14天，眼動(dòng)反應(yīng)逐漸恢復(fù)到損傷前水平。

視動(dòng)反應(yīng)（optomotor response，OMR）

OMR裝置由外到內(nèi)，依次由環(huán)形的白色燈光，滾動(dòng)的黑白光柵，透明的圓柱形魚(yú)缸及不透明的圓柱形阻擋物組成；在環(huán)形的白色燈光照射下，內(nèi)側(cè)貼有黑白條紋白紙的透明塑料圓柱旋轉(zhuǎn)時(shí)，可以形成滾動(dòng)的黑白光柵刺激，并且旋轉(zhuǎn)的速度和方向以及黑白光柵的間距可以進(jìn)行調(diào)整；成年斑馬魚(yú)在一個(gè)透明的圓柱形魚(yú)缸中可以自由游動(dòng)，不透明的圓柱放在魚(yú)缸正中央，用來(lái)防止斑馬魚(yú)直接穿過(guò)中央?yún)^(qū)域游動(dòng)；當(dāng)黑白光柵轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)，斑馬魚(yú)會(huì)追隨光柵做規(guī)律游動(dòng)。每條魚(yú)都在連續(xù)兩次的一分鐘試驗(yàn)中進(jìn)行視動(dòng)反應(yīng)測(cè)試；刺激模式的旋轉(zhuǎn)方向一個(gè)是順時(shí)針，另一個(gè)是逆時(shí)針，方向是隨機(jī)的，這樣做是為了排除任何方向性偏差；視動(dòng)反應(yīng)的符合率是斑馬魚(yú)追正確追隨光柵游動(dòng)的時(shí)間占整個(gè)觀察時(shí)間的比例。

斑馬魚(yú)視動(dòng)反應(yīng)檢測(cè)裝置示意圖

A：斑馬魚(yú)視動(dòng)反應(yīng)裝置側(cè)視圖；B：斑馬魚(yú)視動(dòng)反應(yīng)裝置俯視圖，斑馬魚(yú)視動(dòng)反應(yīng)裝置由環(huán)形的白色燈光，滾動(dòng)的黑白光柵，透明的圓柱形魚(yú)缸及不透明的圓柱形阻擋物組成。

眼動(dòng)反應(yīng)（optokinetic response，OKR）

OKR裝置和視動(dòng)反應(yīng)裝置類似，由外到內(nèi)，依次由環(huán)形的白色燈光，滾動(dòng)的黑白光柵及透明的圓柱形魚(yú)缸組成；將斑馬魚(yú)身體固定在透明的圓柱形魚(yú)缸底部，使斑馬魚(yú)眼睛位于圓柱形魚(yú)缸正中央；在黑白光柵刺激下，斑馬魚(yú)眼睛會(huì)追隨光柵轉(zhuǎn)動(dòng)，直至其眼睛不能再繼續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)后，以一個(gè)急劇的眼球顫動(dòng)回到正位，隨后進(jìn)入下一個(gè)循環(huán)；為了確定視力，周/度（cyclesperdegree，cpd）使用以下公式計(jì)算：cpd=1/2[arctan(h/2a)]，其中a是從斑馬魚(yú)晶狀體中心到光柵的距離，h是觀察到OKR的最小光柵的一個(gè)周期的長(zhǎng)度。

參考文獻(xiàn)：

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