自2017年3月以來，美國多州持續爆發的甲型肝炎疫情已引發公共衛生部門高度關注。疫情已蔓延至30個州，主要感染群體為吸毒人員，包括注射吸毒者（PWID）和無家可歸者。受污染的注射吸毒器具及這些物品的共用可能助長HAV在這些人群中的傳播。

在此背景下，美國亞特蘭大疾病控制和預防中心Magdalena Medrzycki及其團隊 研究了HAV在注射吸毒者頻繁共享的吸毒器具上的存活情況。 相關研究內容以“ Hepatitis A virus survival on drug paraphernalia ”為題發表在《

Journal of Viral Hepatitis

研究內容

本研究 將空 斑測定結果與 同期 獲得的qRT-PCR結果 進行比對 ，以確定HAV RNA水平是否可以作為 空 斑測定結果的替代 指標 。在室溫 條件 下，將懸浮于最 低 必需培養基中的HAV 持續 感染FRhK4細胞超過17周。根據針頭規格和注射器體積，HAV在注射器/針頭中可存活長達10周， 而在廚具 、止血帶 及 棉球/過濾 器 表面可存活長達4周。HAV在pH低至 2的酸性環境中仍能保持傳染性超過10周。

空斑測定法是一種用于確定感染哺乳動物細胞中病毒滴度的標準精確程序。盡管該方法精度極高，但耗時且難以規模化應用。定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）作為病毒學研究中常用的快速精準檢測手段，其局限性在于無法區分具有感染性與非感染性的病毒顆粒。通過空斑測定和qRT-PCR檢測HAV RNA水平，以確定原始接種物中感染性病毒顆粒的比例。此外，在凍融過程前后對樣本進行分析，以評估其對感染潛力的影響。qRT-PCR檢測顯示的病毒顆粒數量是空斑測定結果的4.4倍。兩項實驗結果表明： 體外培養的HAV病毒顆粒中約22.5%具有感染潛力，且凍融過程會進一步降低其感染性 。

表1 冷凍和解凍過程對HAV RNA水平和HAV存活的影響

HAV在培養基中 擴增 后的長期存活情況結果顯示，HAV的感染力按照半衰期規律逐漸減弱，當初始滴度為每毫升200萬個感染性顆粒時，溶液在大約20到21周后不再含有感染性顆粒（圖1A ） 。HAV在不同溫度下的存活情況結果顯示，在4°C時，HAV的感染力在4周內下降約0.5個對數單位；在室溫（21°C）下，HAV的感染力在實驗期間下降約2個對數單位；而在37°C時，HAV的感染力在3周內損失約5.5個對數單位；而在45°C時，HAV的感染力在第三周時完全喪失（圖1B ） 。qRT-PCR估計的病毒滴度在任何試驗溫度下均未發生顯著變化，表明即使 病毒顆粒喪失感染性，HAV RNA在 以上實驗 溫度 條件 下也具有穩定性 （圖1B ） 。

圖1 溫度對 HAV 在DMEM細胞培養基中存活的影響

在 本 實驗中測試1cc胰島素注射器，其配有27G、28G、29G、30G、31G針頭以及一個可拆卸的25G針頭。將每支注射器/針頭中注入1毫升含HAV的溶液（4.5×10?個感染性病毒顆粒/mL），并將其完全排出。圖2顯示從1 mL注射器/針頭沖洗液中收集的12周數據結果。帶有可拆卸25G針頭的注射器可保留感染性病毒長達10周，而其他所有組別僅在第6周觀察到 空斑 。在10周的 實驗 期間，所有測試的注射器/針頭組合中，HAV RNA水平均未發生變化，表明 HAV RNA在室溫下對污染的注射器設備具有較強的抗降解能力 。

圖2 室溫下注射器/針頭中的HAV長期存活

注射藥物的制備需要使用多種可能被污染的物品，如果這些物品被共享或重復使用，可能會將HAV傳播給注射藥物的人。圖3顯示在室溫干燥條件下HAV在不同器具上存活6周的情況。在 廚具 和止血帶上的傳染性損失趨勢非常相似。傳染性顆粒的數量在前10天逐漸減少，第2周降至約2個對數單位，第4周無法檢測到 空斑 。由于棉質過濾器結構更為緊湊， 其 顆粒截留率遠高于棉球 ， 第0天棉質過濾器檢測到的 空斑 數量是棉球的三倍。與注射器或溶液中的半干/濕條件相比 ，廚具 、止血帶、棉質過濾器和棉球上HAV RNA水平下降 ， 表明 HAV RNA在干燥條件下更容易降解 。

圖3 干燥條件下藥物器具上HAV的存活情況

降低 藥物溶解溶液的pH值是PWIDs 中 常見的做法。圖4A展示向1 mL 溶液中添加不同 質量 檸檬酸后的pH值變化。為測試因pH值下降而對HAV感染性的影響， 向 六個含有10 mL 病毒溶液的試管分別 加入 0、5、10、25、50和100mg的檸檬酸。實驗持續8周，在每個時間點同時進行 空斑 測定和qRT-PCR檢測。HAV感染力隨pH值變化的下降趨勢 如 圖4B 所 示。溶液中的100 mg檸檬酸（pH 1.72）在幾天內使HAV失活（第8天未發現 空斑 ） 。pH為1.87時，約80%的HAV顆粒在兩周后仍具有感染性，但在第4周未檢測到空斑。pH為2.23時，初始病毒的滴度在第6周幾乎減半。令人驚訝的是，在第8周時，pH 2.39 (10 mg檸檬酸）和2.79 (5 mg檸檬酸）中檢測到的空斑比不含檸檬酸的對照溶液中的空斑更多。這可能是由于 pH誘導的病毒顆粒或細胞的改變，從而促進病毒附著 。在檸檬酸濃度最高的溶液（最低pH）中，HAV RNA水平下降2個對數單位，在較高pH值下下降大約1個對數單位。對照組的RNA水平下降幅度最小，表明 低pH值可能對HAV RNA的穩定性有潛在的抗病毒作用 。

圖4 低pH對HAV存活的影響

小結

綜上所述 ，本研究 表明根據表面和環境條件， HAV可存活并保持傳染性長達20周 。干燥環境對HAV的存活最不利，因為HAV滴度和RNA濃度比在潮濕環境中降解得更快。室溫下注射器和針頭中捕獲的HAV污染溶液傳染性可長達10周，這取決于注射器體積的大小而非針頭的大小。HAV懸浮液在液體條件下能夠以病原體顆粒的形式存活最長時間，根據其初始滴度，存在約20周的感染風險。在半干燥和潮濕條件下，HAV RNA水平在較長時間內沒有變化。較低的溫度有利于HAV的存活，而較高的溫度有利于滅活。病毒完全滅活所需時間取決于病毒懸浮液的初始滴度；因此，本研究中病毒滴度對應于患者感染后3~7周的血清滴度。研究結果表明，在任何環境下吸毒者共用毒品用具都可能會促進這些人群中HAV的傳播。此外，本研究結果證實，空斑測定法目前是確定HAV體內感染性的唯一可靠方法。

參考文獻：Medrzycki M, Kamili S, Purdy MA. Hepatitis A virus survival on drug paraphernalia. J Viral Hepat. 2020;27:1484–1494

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