大小鼠腎纖維化模型

腎纖維化是慢性腎臟病（CKD）進(jìn)展至終末期的共同病理特征，涉及腎間質(zhì)纖維化、腎小球硬化等病理改變。目前，常用的大小鼠腎纖維化模型包括單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）模型、缺血再灌注（IRI）模型、藥物誘導(dǎo)模型（如腺嘌呤、環(huán)孢素A）以及遺傳修飾模型等。

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動(dòng)物模型構(gòu)建咨詢

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一、

模型構(gòu)建方法選擇

1. 手術(shù)模型

① 單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）模型

構(gòu)建方法：通過手術(shù)結(jié)扎單側(cè)輸尿管（大鼠常用），導(dǎo)致尿液潴留和腎間質(zhì)纖維化。小鼠模型需精準(zhǔn)分離輸尿管并雙重結(jié)扎后剪斷。

病理特征：術(shù)后3-7天出現(xiàn)腎小管擴(kuò)張、炎癥浸潤(rùn)；14-21天纖維化顯著，膠原沉積增加。

適用場(chǎng)景：研究腎間質(zhì)纖維化的早期機(jī)制及藥物干預(yù)效果。

② 缺血再灌注（IRI）模型

構(gòu)建方法：夾閉腎動(dòng)脈（通常25-45分鐘）后恢復(fù)血流，誘導(dǎo)急性腎損傷（AKI）向慢性纖維化發(fā)展。C57BL/6小鼠缺血時(shí)間推薦26分鐘。

病理特征：術(shù)后2-4周出現(xiàn)腎小管萎縮、間質(zhì)纖維化，適用于研究AKI-CKD轉(zhuǎn)化機(jī)制。

優(yōu)缺點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，但需控制缺血時(shí)間以避免動(dòng)物死亡。

③ 腎大部切除模型

造模方法：手術(shù)切除大鼠部分腎臟（如5/6腎切除），誘導(dǎo)剩余腎臟發(fā)生代償性肥大和纖維化。

特點(diǎn)：模擬慢性腎衰竭的病理過程，適用于研究慢性腎臟病的發(fā)病機(jī)制和進(jìn)展

1. 藥物誘導(dǎo)模型

① 腺嘌呤模型：高劑量腺嘌呤（300 mg/kg/d，灌胃21天）導(dǎo)致腎小管損傷和肉芽腫形成，適用于研究腎小管間質(zhì)纖維化。

② 環(huán)孢素A模型：皮下注射環(huán)孢素A（15 mg/kg/d，28天），誘導(dǎo)腎毒性纖維化，但成本高且具肝毒性。

③ 陽離子牛血清白蛋白（C-BSA）模型：通過多點(diǎn)皮下注射和尾靜脈注射C-BSA誘導(dǎo)蛋白尿及腎小球硬化，適用于研究慢性腎病進(jìn)展。

3. 遺傳修飾模型

① Smad3基因敲除模型：通過基因編輯技術(shù)抑制TGF-β/Smad信號(hào)通路，研究其對(duì)纖維化的調(diào)控作用。

二、

模型驗(yàn)證指標(biāo)

1. 組織病理學(xué)分析

① HE染色：觀察腎小管擴(kuò)張、炎細(xì)胞浸潤(rùn)及結(jié)構(gòu)破壞。

② Masson染色：定量膠原纖維沉積（藍(lán)色區(qū)域占比），評(píng)估纖維化程度。

③ PAS染色：檢測(cè)腎小球基底膜增厚及系膜基質(zhì)擴(kuò)張。

2. 生化指標(biāo)檢測(cè)

① 尿蛋白定量：24小時(shí)尿蛋白升高提示腎小球損傷。

② 血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）：反映腎功能狀態(tài)。

③ 尿NAG酶活性：腎小管損傷標(biāo)志物。

3. 分子機(jī)制驗(yàn)證

① TGF-β、α-SMA、膠原蛋白I/III：通過qPCR或Western blot檢測(cè)纖維化相關(guān)基因和蛋白表達(dá)。

② 炎癥因子（TNF-α、IL-6）：評(píng)估炎癥反應(yīng)程度。

三、

模型優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用場(chǎng)景

四、

模型選擇建議

1. 研究目的導(dǎo)向：

急性纖維化機(jī)制：優(yōu)先選擇UUO或IRI模型。

慢性纖維化進(jìn)展：推薦5/6腎切除或腺嘌呤模型。

信號(hào)通路研究：使用遺傳修飾模型（如Smad3敲除）。

2. 物種選擇：

大鼠：適用于UUO、IRI及藥物誘導(dǎo)模型，操作成熟。

小鼠：適合基因編輯模型，但需注意品系差異（如C57BL/6對(duì)缺血敏感）。

文獻(xiàn)案例

【文章題目】

Tamoxifen attenuates renal fibrosis in human kidney slices and rats subjected to unilateral ureteral obstruction

他莫昔芬減輕人腎切片和單側(cè)輸尿管梗阻大鼠的腎纖維化

Biomedicine & Pharmacotherapy ( IF 6.9 )

Pub Date : 2020-11-20

DOI: 10.1016/j.biopha.2020.111003
Stine Julie Tingskov, Michael Schou Jensen, Casper-Emil Tingskov Pedersen, Isabela Bastos Binotti Abreu de Araujo, Henricus A M Mutsaers, Rikke N?rregaard.

【文獻(xiàn)摘要】

目的：腎纖維化在慢性腎臟病（CKD）的發(fā)生和進(jìn)展中起著重要作用。臨床研究表明，男性和女性的 CKD 進(jìn)展情況不同，這可能與性激素的循環(huán)水平有關(guān)。在這項(xiàng)研究中，我們研究了他莫昔芬（TAM）（一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑（SERM））對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）和人體精密切割腎切片（PCKS）的雄性和雌性大鼠腎纖維化的影響。

方法：雌性、卵巢切除雌性 (OVX) 和雄性大鼠接受 7 天的 UUO 治療，并通過口服強(qiáng)飼法用 TAM 治療。此外，我們研究了女性和男性患者對(duì) PCKS 中 TAM 治療的個(gè)體反應(yīng)。在所有模型中，通過蛋白質(zhì)印跡、qPCR 和免疫組織化學(xué)檢查纖維化標(biāo)志物的表達(dá)。

結(jié)果：TAM 降低雌性、OVX 和雄性大鼠中纖連蛋白、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白以及膠原蛋白-1 和-3 的表達(dá)。此外，無論性別如何，TAM 都能減輕 TGF-β 誘導(dǎo)的人類 PCKS 纖維化，但觀察到治療反應(yīng)存在個(gè)體差異。

結(jié)論：盡管我們確實(shí)觀察到藥物反應(yīng)存在性別差異，但 TAM 可以改善男性和女性的腎纖維化。這些發(fā)現(xiàn)值得進(jìn)一步研究 TAM 或其他 SERM 在腎臟疾病個(gè)性化治療中的臨床適用性。

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