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外泌體因其獨特的生物學特性，在疾病診斷、藥物遞送和再生醫學中展現出巨大的潛力，成為醫學領域的創新前沿。

然而，要將這一“微型信使”真正應用于臨床，必須依賴嚴格的質量控制，從制備到儲存、從純化到功能驗證，每個環節環環相扣、精益求精。只有這樣，外泌體才能成為安全可靠的醫學工具，為精準醫療開辟新道路。

01

制備質控：對話細胞

外泌體的制備過程就像一場精心設計的“細胞對話”，每一個環節都會影響最終結果。

首先，選擇適當的細胞來源至關重要。研究發現，不同細胞來源的外泌體所攜帶的內容物也不盡相同。不同來源的外泌體在功能、特性以及應用價值上存在著顯著的差異。

此外，細胞的生長環境也在悄然影響著外泌體的“性格”。為了避免外源性外泌體的污染，科學家們通常推薦使用低血清或無血清的培養基。同時對培養基進行超速離心，以清除其中可能含有的外泌體顆粒。

培養基中的生長因子濃度、氧氣水平的調節，甚至是外界刺激（如藥物或物理因子）都會改變細胞分泌外泌體的數量和重量。

因此，保持培養條件的一致性，不僅是實驗數據的保障，更是保障外泌體功能穩定性的關鍵所在。

02

純化質控：挑選珍珠

在細胞培養制備到目標種類的外泌體后，接下來要進行外泌體的純化。外泌體的純化過程就像挑選珍珠，需要在效率和純度之間找到平衡。

科學家們常用的純化方法各有特點，從原理上分為4類，分別有：

基于密度的分離方法—差速離心技術、等密度梯度離心技術；

基于尺寸的分離方法—尺寸排阻色譜技術和超濾技術；

基于聚合物共沉淀的分離方法—聚合物共沉淀試劑盒技術；

基于免疫親和的分離方法—磁珠技術、色譜固相分離技術、酶聯免疫吸附分離技術。

只有根據用途選擇合適的純化方法、嚴格執行純化流程，才能確保外泌體具備理想的功能，為臨床應用奠定堅實基礎。

03

外泌體鑒定：嚴選精英

完成外泌體的提取和純化后，還需要進行精確的鑒定，以確認樣品的純度和功能，這一步至關重要。國際細胞外囊泡學會（ISEV）發布的MISEV2018指南明確指出，鑒定外泌體需要綜合多個方法。

首先，通過標志物檢測驗證樣品質量。例如，使用Western blot或ELISA檢測外泌體特有的蛋白標志物（如CD63、TSG101），同時排查污染標志物（如胞核蛋白Calnexin），以確保沒有細胞碎片或其他雜質混入。

其次，透射電子顯微鏡（TEM）觀察外泌體的形態和大小，確認其為30-150納米的球形雙層囊泡。動態光散射（DLS）或納米顆粒跟蹤分析（NTA）則用來測量外泌體的粒徑分布和濃度，從而評估樣品的一致性。

此外，指南還推薦通過蛋白質/顆粒比、蛋白質/脂質比或RNA/顆粒比等數據進一步驗證純度和功能。

這些嚴格的鑒定步驟，不僅是對研究結果的保障，更是外泌體應用于臨床的質量基石。

04

儲存質控：保持活力

外泌體的儲存條件直接影響其“活性”。

科學家建議在?80°C冷凍保存外泌體，避免常溫或4°C的長期儲存，因為后者容易導致顆粒聚集和降解。

此外，凍融次數要盡量減少，因為每一次解凍都會對外泌體的結構造成損害，削弱其功能。為了防止顆粒附著在儲存容器表面，緩沖液中需加入低附著性的成分（如PBS）。

只有精心的儲存才能保住外泌體的“健康”，為后續研究和應用提供保障。

05

生物安全與功能評估：最后一關

外泌體進入臨床應用前，生物安全性是首要考量。必須嚴格檢測樣品中的細菌、病毒和細胞碎片等污染物，確保其“純凈無瑕”。

此外，還需要驗證外泌體的功能，如其信號傳遞能力和藥物遞送效率，以確保這些“信息快遞員”能準確無誤地完成任務。

這些措施不僅是對患者安全的負責，更是外泌體成為可靠醫學工具的必要保障。

小 結

只有通過標準化的生產流程和精準的質量檢測，才能保證外泌體在臨床治療中發揮其最大潛力，確保患者的安全。從實驗室走向真實的用戶，需要穩扎穩打走好這條醫療外泌體的質控路。

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