? 干細(xì)胞衍生的細(xì)胞外囊泡(stem cell-derived extracellular vesicles, SC-EVs)，這作為一種“無細(xì)胞的干細(xì)胞療法新秀”，已經(jīng)成功在多項(xiàng)臨床實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出卓越的治療效果。

?跟傳統(tǒng)的干細(xì)胞移植相比，SC-EVs技術(shù)不存在腫瘤化、免疫排斥等干細(xì)胞移植的風(fēng)險，臨床實(shí)驗(yàn)當(dāng)中表現(xiàn)出更高的安全性。

? 然而，對于SC-EVs研究者而言，分離、鑒定、質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)仍然存在不同程度的爭議與分歧，并且缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。

? 由于缺乏統(tǒng)一的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)與要求，導(dǎo)致市場上有關(guān)于外泌體的產(chǎn)品近年來處于一邊在市場上形成熱點(diǎn)，卻又一邊被人詬病“概念先行，真?zhèn)坞y辯”的尷尬地位。

一、國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施

? 為解決上述問題，國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會聯(lián)合領(lǐng)域內(nèi)300多位專家聯(lián)合發(fā)布了研究指導(dǎo)——Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018(MISEV2018)，以規(guī)范化外泌體技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)的相關(guān)研究，同時給予研究者標(biāo)準(zhǔn)化的相關(guān)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。

? 此外，F(xiàn)DA（美國食品藥品監(jiān)督管理局）也發(fā)布了關(guān)于干細(xì)胞和外泌體產(chǎn)品的公共安全公告，強(qiáng)調(diào)基于SC-EVs治療的標(biāo)準(zhǔn)化及其法規(guī)的正式建立。

? 作為中國第一個EVs領(lǐng)域的專業(yè)協(xié)會——中國研究型醫(yī)院學(xué)會細(xì)胞外囊泡研究與應(yīng)用分會（CSEV），同時召集了來自中山大學(xué)、南方醫(yī)科大學(xué)、上海交通大學(xué)、江蘇大學(xué)、廈門大學(xué)等國內(nèi)從事干細(xì)胞來源sEVs研究的主要學(xué)者，首次制定國內(nèi)《人多能干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡》（T/CRHA 002-2021）及《人間充質(zhì)干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡》（T/CRHA 001-2021）的二項(xiàng)全國團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，以進(jìn)一步推動SC-EVs相關(guān)技術(shù)的正式落地、建立行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范行業(yè)發(fā)展，同時也為國內(nèi)研究人員提供標(biāo)準(zhǔn)化指導(dǎo)。

? 該團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)還正式規(guī)定了間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的質(zhì)量控制方法，適用于間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的制備、儲存、運(yùn)輸與應(yīng)用等多個環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，同時確定了小細(xì)胞外囊泡形態(tài)、小細(xì)胞外囊泡粒徑、小細(xì)胞外囊泡數(shù)量等重要標(biāo)準(zhǔn)，成功填補(bǔ)國內(nèi)外泌體產(chǎn)業(yè)發(fā)展標(biāo)準(zhǔn)的空白。

二、節(jié)選標(biāo)準(zhǔn)重點(diǎn)解讀

? 4技術(shù)要求

?4.1 原材料和輔料

? 4.1.1 生產(chǎn)人間充質(zhì)干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡的過程中，使用的原材料和輔料應(yīng)符合 T/CSCB 0001.T/CSCB 0003 的要求。

? 4.1.2 生產(chǎn)人間充質(zhì)干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡的過程中，人間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)體系見附錄 A。

?4.2 關(guān)鍵質(zhì)量屬性

?4.2.1 人間充質(zhì)干細(xì)胞

?用于生產(chǎn)小細(xì)胞外囊泡的人間充質(zhì)干細(xì)胞的關(guān)鍵質(zhì)量屬性均完全符合 T/CSCB 0003 的規(guī)定。

?4.2.2 小細(xì)胞外囊泡

?4.2.2.1 形態(tài)

?透射電鏡下應(yīng)呈現(xiàn)不聚團(tuán)的具有清晰膜結(jié)構(gòu)的茶托狀或杯狀結(jié)構(gòu)，邊緣清晰。

? 4.2.2.2 粒徑

?應(yīng)分布在小于 200 nm的范圍內(nèi)，且在該范圍內(nèi)存在粒徑峰值。

?4.2.2.3 標(biāo)志蛋白

?小細(xì)胞外囊泡表面標(biāo)志物CD9、CD81、CD63 中的任意兩個表達(dá)陽性；小細(xì)胞外囊泡內(nèi)部標(biāo)志物TSG-101、Alix 中的任意一個表達(dá)陽性。

?4.2.2.4 純度

?小細(xì)胞外囊泡陰性標(biāo)志物 GM130 或 Calnexin 應(yīng)為陰性;小細(xì)胞外囊泡數(shù)量與蛋白量比值不低于1X1088個顆粒/μg 蛋白。

?4.2.2.5 免疫調(diào)節(jié)

?人間充質(zhì)干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡與健康人來源的外周血單個核細(xì)胞共孵育,能抑制其增殖，抑制Th1細(xì)胞功能。

? 4.2.2.6 微生物

HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP、真菌、細(xì)菌、支原體均應(yīng)為陰性。

? 4.3 過程控制

?應(yīng)記錄小細(xì)胞外囊泡的分離方法

? 以上是節(jié)選《人間充質(zhì)干細(xì)胞來源的小細(xì)胞外囊泡》部分內(nèi)容，由此可見，挑選外泌體產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)有以下幾個重點(diǎn)。

? 首先，看大小。外泌體要足夠的小，才能輕松穿透各類屏障，實(shí)現(xiàn)靶向治療的效果。因此，標(biāo)準(zhǔn)要求的是小于 200 nm 的范圍內(nèi)，30-150nm之間為佳。

? 其次，看形態(tài)。標(biāo)準(zhǔn)要求透射電鏡下的外泌體，需具有清晰膜結(jié)構(gòu)的茶托狀或杯狀結(jié)構(gòu)的囊泡形態(tài)，形態(tài)完整的外泌體才能發(fā)揮其真正作用。

? 再次，看表面標(biāo)志物。標(biāo)準(zhǔn)要求小細(xì)胞外囊泡表面標(biāo)志物 CD9、CD81、CD63 中的任意兩個需要表達(dá)陽性，小細(xì)胞外囊泡陰性標(biāo)志物 GM130 或 Calnexin 應(yīng)為陰性，這些才是外泌體的表面標(biāo)志物。

? 從次，看儲存和運(yùn)輸條件。外泌體屬于生物制品，內(nèi)含大量的活性顆粒，包括各類蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、修復(fù)因子等活性成分，需要精心呵護(hù)，一旦暴露在常溫下，這類活性成分會迅速降解乃至失效。

? 最后，看產(chǎn)品活性。由于外泌體是超小顆粒，因此產(chǎn)品活性用肉眼無法分辨，需要檢測其顆粒數(shù)，其一瓶包含的囊泡顆粒數(shù)的多少，就是活性和效果的體現(xiàn)，足夠活性的外泌體才是真正優(yōu)質(zhì)的外泌體。

三、小結(jié)

? 隨著我國干細(xì)胞外泌體團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布和實(shí)施，標(biāo)志著外泌體產(chǎn)品的研發(fā)與應(yīng)用打通了實(shí)驗(yàn)室技術(shù)向產(chǎn)業(yè)化轉(zhuǎn)化的通道，讓外泌體產(chǎn)品不再受困于“概念真?zhèn)巍钡南拗疲瑸榘踩⒂行У厥褂酶杉?xì)胞外泌體提供有力保障，同時給終端消費(fèi)者看到來自國家和行業(yè)的保障，助力行業(yè)的健康發(fā)展。

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