在進行超濾實驗的過程中,研究人員可能會面臨一系列挑戰和難題。首先,流速過慢的問題常常導致離心機需要從晚上持續運行到凌晨,這不僅增加了實驗人員的工作時長,還可能影響實驗進度。其次,濃縮過程的失敗會直接影響實驗結果,進而增加研究人員的壓力。此外,過濾過程中的困難,如PBS難以順利過濾,也會對實驗進度產生不利影響。濾膜的頻繁堵塞,尤其是在蛋白換液時超濾管的堵塞,不僅會浪費時間,還可能導致實驗進度的延誤。最后,蛋白的損失,如離心后蛋白的泄漏,會導致實驗結果的不準確,給研究人員帶來額外的困擾。這些問題不僅降低了實驗的效率,還可能對研究人員的心理狀態產生負面影響。
如何根據我的樣品體積,選擇對應的超濾產品?
選擇合適的超濾產品以適應不同樣品體積的需求,賽多利斯提供了廣泛的超濾產品系列。這些產品能夠覆蓋從0.1毫升到5升的樣品體積,適用于超濾和透析過程。樣品處理方式多樣,包括離心、加壓、加壓離心以及切向流過濾(TFF)技術,以滿足不同實驗條件和需求。
不同的超濾方式有什么特點和區別呢?
1、賽多利斯的Vivaspin超濾管
常用的是離心方式,過程溫和,方便快速,可為大多數樣品溶液提供濃縮過濾,用于純化和濃縮蛋白質、核酸、病毒、大分子和納米顆粒等
2、Vivaspin 20和Vivaspin 100超濾杯
可以在氣體壓力下運行,Vivaspin? 20也可以通過加壓離心運行,兩者相結合的處理時間通常比離心快30 %到50 %
3、Vivaflow 切向流過濾膜包
能夠快速處理大體積樣品,減少濾膜堵塞,有效回收目標分子。可拓展性強,適用于濃縮、脫鹽、澄清和分離等多種操作
超濾膜材質多種多樣,都適合我的樣品嗎,我該如何進行選擇呢?
推薦四種膜材質供選擇:聚醚砜(PES)、再生纖維素(RC)、改良型再生纖維素(Hydrosart RC)和三醋酸纖維素(CTA)。這些膜材質各有其獨特的優勢和應用領域,如圖所示:
我目前做的是XXX樣品,有對應的超濾管供選擇嗎?
賽多利斯的膜材質和孔徑十分齊全,在選型正確的前提下,可以確保任何生物分子的最大回收率!
如何選擇最佳的截留分子量(MWCO)呢?
在選擇超濾膜時,通常遵循1/3的原則;若截留率是首要考慮因素,可以選擇較小的截留分子量(MWCO),比如1/6;若流速更為重要,則可以選擇較大的MWCO,如1/2。需要注意的是,不同品牌提供的截留分子量(MWCO)可能存在細微差別,因此在選擇時應考慮這些差異,不能一概而論。
我的樣品是核酸,如何把單位bp換算成對應的截留分子量KDa呢?
MWCO截留分子量與nm納米 / bp值的換算關系如圖所示。
超濾管使用過程中,對于離心機的擺放有什么要求?
超濾過程中,請注意離心力一定不要作用在膜上,水平轉子或角轉子的要求也不一樣哦,詳情請看圖示。
使用不同超濾管時的離心力如何設置? 最大處理體積分別是多少?
做實驗時需要調整離心力在超濾膜的承受范圍內,如果轉速太高,可能導致膜破裂。建議在超濾管中加入樣品時不要超過最大體積,以賽多利斯的Vivaspin Turbo 15為例,若使用水平轉子,樣品不得超過15mL,若使用角轉子則不超過9mL。
另外,建議核酸樣品的離心力比蛋白樣品離心力低一半左右。而如果是線性分子,在低的離心力條件下可以獲得更好的濃縮效果哦!
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