對于過柱子,如果遇到研究生把樣品層疊很高,內心免不了吐槽兩下:得,又瞎了!
總體來講,柱子樣品層鋪很薄是為了:①提高分離效果、②避免拖尾和交叉污染、③加快分離速度;
具體表現在:
1、減少樣品橫向擴散;
樣品在柱子中隨著流動相向下移動時,如果樣品層過厚,樣品分子容易在橫向發生擴散,使得各組分的區域變寬,從而影響分離的分辨率。而薄的樣品層能使樣品在柱子中保持相對集中的區域,沿著柱子軸向更有序地移動,各組分之間的界限更加清晰,提高分離效果。
2、便于流動相滲透
薄的樣品層可以減小流動阻力,使流動相在柱子中更順暢地通過,充分滲透到樣品層中,與樣品進行有效的相互作用和洗脫。
如果樣品層過厚,可能會堵塞柱子或部分堵塞柱子(粘性油狀物經常遇到),使流動相的流動不均勻,兩端正常,而中間形成溶劑真空帶,導致分離交叉污染;
3、更高效率的交換
過柱子,首先進行的是樣品各個組分和硅膠的吸附作用;其次是用不同組分的溶劑分子對硅膠中吸附的分子進行置換;
如果樣品層過厚,對吸附過程影響不大,但微觀層面上的置換過程會因為不同組分相互擠壓,導致本應在不同時間洗脫下來的組分發生混合,造成交叉污染,這個在分析上就是過載,;
4、減少殘留
作為一個有機茍,就算一個十幾步的定制合成,我都是非常茍的。
比如即使過完的柱子,最后都習慣大極性的良性溶劑比例沖一下,然后把接收瓶里的全部旋干TLC,觀察柱子中還有無殘留。
對于大量的固體化合物,過載情況下,很容易殘留!
最后,其實過柱子樣品層要鋪很薄,和你TLC爬板子點樣的時候不要點太濃是同樣的道理。
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