許多行業(如制藥、生物技術、食品等)對生產環境的潔凈度有嚴格的法規要求。通過動態監測,可以實時或定期了解潔凈區的空氣潔凈度、懸浮粒子濃度、微生物數量等關鍵指標,確保它們符合既定的標準或規范要求,可以確保潔凈區環境符合相關法規和標準的要求,避免合規風險。
01
動態監測的方法和注意點
1、 懸浮粒子
目前,懸浮粒子的測定方法主要有顯微鏡法和自動粒子計數法兩種,而用于潔凈區空氣懸浮粒子監測的儀器多為光散射粒子計數器和激光粒子計數器。
綜合實際情況,建議在A 級區內采用連續監測系統檢測空氣懸浮粒子。在線監測系統可以實時反饋監測信息,以便監控人員及時提出解決其中存在問題的方法。比如,提醒操作人員減緩動作幅度,為環境清潔、消毒、停機等待等生產過程控制提供依據。與此同時,還要為空調過濾器的日常檢查、維護建立一套完善的操作、檢測、更換程序。只有這樣做,才能有效地控制其中存在的風險。
【在線懸浮粒子監測】
2、 浮游菌
經常使用撞擊法中的狹縫式采樣器監測浮游菌采樣器,通過多孔蓋抽取空氣,而氣流中的微生物則撞擊附著在標準培養皿中瓊脂培養基的表面。通常情況下,在測定浮游菌時,每個采樣點的取樣量不得少于1m3,而在生產過程中,可以設定采樣器,利用采樣、等待、再采樣的間隙方式監測生產全過程。另外,浮游菌采樣器還有篩孔撞擊式、表面真空取樣、離心式、過濾式和液體沖擊式等采樣方式。
沉降菌是用暴露法收集降落在培養皿中的活生物性粒子,并將其培養、繁殖后加以計數所得。沉降菌測定的培養皿應布置在有代表性的地方和氣流擾動最小的地方。具體的采樣方法和培養方法是,將培養皿放置在接近于操作高度的位置后,打開外蓋并倒扣放置,使培養基表面暴露出來。在靜態監測時,培養皿應放置不少于30min 后再將外蓋蓋上收集;在動態監測時,暴露時間應根據沉降碟本身和環境兩方面因素驗證所得,單個沉降碟的暴露時間可以少于4h,但是,不得超過4h。在同一位置,可以使用多個沉降碟連續監測并累積計數,然后收集,酵母菌和霉菌通常在20~25 ℃的條件下培養5~7d后計數,而需氧菌通常在30~35 ℃的條件下培養48~72h 后計數。沉降碟以其價廉、輕便、對空氣環境破壞較小等優點被廣泛應用于潔凈區環境檢測中。
但是,在使用沉降碟時,應先確認沉降碟的暴露時間(記下平皿打開和結束的時間),以保證暴露后的培養基不會因失水等原因而影響微生物的正常生長。目前,好多廠家的培養皿是本廠自配的,密封性沒有購買的培養皿強,在生產過程中,轉運會對培養皿本身造成污染,使所得的結果出現假陽性。所以,建議在生產過程中,應使用培養皿本身的空白對照或購買密封性好的培養皿,以提高檢測結果的可信度。
4、物體表面微生物測試
物體表面微生物測試可以確定物體(包括工作服)表面微生物的污染程度。一般情況下,可以使用棉簽間接取樣后培養、直接接觸法取樣和表面沖洗法3種方法,而利用直接接觸法時,所用的接觸碟要放置至室溫后使用。
4.1棉簽擦拭表面取樣方法
棉簽擦拭表面取樣方法的取樣面積一般為25cm2,人體表面擦拭至少應包括雙手手指印、頭、口罩、肩部、前臂、手腕和腿等。棉簽間接取樣適用于不規則表面,取樣時,手握住拭子柄,以30°角與取樣表面接觸,采用S 型或Z 型緩慢并旋轉棉簽充分擦拭。如果拭子頭為藻酸鈣材料,則要用稀鹽酸溶液作為稀釋劑(比如質量分數為1%的檸檬酸鈉溶液),這樣才能讓拭子頭完全溶解。
4.2直接接觸法
直接接觸法是將接觸碟直接接觸需采樣的物體表面,接觸時間一般在10s左右,培養后便會長出菌落。因為該方法容易操作而且可以定量,所以被廣泛使用。但是,這個測試只適用于平整光滑的表面,通常在灌封或灌裝后清場前取樣。取樣后,需用蘸有質量分數為75%的乙醇的紗布擦拭被取樣表面,以除去殘留。將取樣后并做好標記的接觸碟置于培養箱中培養,培養箱的參數一般設定在30~35 ℃,培養72h后計數。
4.3表面沖洗法
表面沖洗法適用于監測大面積區域內表面的微生物含菌量,包括設備軌道、儲水罐等。用定量的無菌水沖洗表面,收集淋洗水,用膜過濾法計算微生物的數量。
5、風速測試檢測
生產過程中A 級區的風速,使生產環境的風速符合指導值(0.36~0.54 m/s),同時,還可以判斷層流是否開啟、是否正常運行、是否被堵或泄漏,使生產環境達到要求。目前,由于安裝的隔離器密閉性良好,所以,經過相應的驗證,也可以適當地降低層流風速。部分文獻指出,A 級區可以選擇正壓無菌紊流的流型,不一定都要選擇層流流型。
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