鏡檢，即顯微鏡檢查是診斷魚病的重要方法之一。有些魚類病原體肉眼看不清或根本看不見，必須借助于顯微鏡、解剖鏡或放大鏡來診斷。如白頭白嘴病是由細菌引起的，其癥狀是頭、嘴發(fā)白，但又往往與車輪蟲病并發(fā)。而患車輪蟲病的病魚中，有時也會有個別病魚頭部或嘴部出現(xiàn)輕微的灰白現(xiàn)象，容易被誤認為是白頭白嘴病。通過鏡檢，就能做出正確的診斷。

顯微鏡是由一個透鏡或幾個透鏡的組合構成的一種光學儀器。是人類進入原子時代的標志。用于放大微小物體成為人的肉眼所能看到的儀器。顯微鏡的種類有很多，常見的有：光學顯微鏡、電子顯微鏡、探針顯微鏡等。我們普通人平常用的大多是光學顯微鏡。

一、顯微鏡的構造

1.物鏡

該鏡頭下端接近被檢物體，為顯微鏡上的主要裝置。由多塊透鏡組成。一般顯微鏡具有3個-4個物鏡，分成干燥系和油鏡兩組，干燥系又按放大倍數(shù)分為低倍鏡和高倍鏡。各物鏡放大率由其外形辨認，鏡頭長度越大，鏡片口徑越小，放大倍數(shù)愈大；反之，放大倍數(shù)小。油鏡頭的下緣，一般刻有一圈黑線。此外，各物鏡上都刻有放大倍數(shù)、孔徑數(shù)等標志。

2.目鏡

目鏡和鏡檢者的眼睛接近。目鏡由兩塊透鏡組成，其上刻有倍數(shù)。為便于指出物像，常在鏡中裝黑色細絲一條，作為指針。

3.聚光器

聚光器位于載物臺下方的次臺上，由數(shù)個透鏡組成。能上下移動，調節(jié)并集聚由光源提供的光線，使集中于載物玻片上。

4.光源

光源提供觀察所需光線，裝在顯微鏡的最下方。

5.鏡臂

鏡臂在鏡筒后面，便于顯微鏡搬移，并作為將鏡筒傾斜時的握持部。

6.底座

顯微鏡的底座用以支持全鏡，呈馬蹄形。

7.載物臺

在物鏡下方，呈方形或圓形，用以載放被檢物體。中央有孔，可以透光。臺上裝有一彈簧夾，鏡檢時可以固定標本片。有的載物臺上裝有載物臺調解旋鈕，捻轉旋鈕，能使標本前后左右移動。

8.光圈

在聚光器下方，可以任意開閉，用以調節(jié)射入集光線的多寡。

9.電源和亮度調節(jié)旋鈕

用于開啟光源和調節(jié)光源的亮度。

10.粗準焦螺旋和細準焦螺旋

粗準焦螺旋可使載物臺較大距離地升降。細準焦螺旋可以精確地調節(jié)距離。

二、顯微鏡的使用方法

（一)調光

(1)鏡檢時身體要正對實驗臺，采取端正的姿態(tài)，調整兩個目鏡之間的距離與觀測者瞳距相符，兩眼自然睜開，同時左手調節(jié)焦距，使物像清晰并移動標本視野，右手記錄、繪圖。將低倍物鏡轉至鏡筒下方與鏡筒成一直線。鏡檢時載物臺不可傾斜，因為當載物臺傾斜時，液體或油易流出，既損壞了標本，又污染載物臺，也影響檢查結果。

(2)利用自然光源鏡檢時，最好用朝北的光源，不宜采用直射陽光；利用人工光源時，用日光燈的光源。轉動底部光源或撥動反光鏡，調節(jié)視野亮度。反光鏡有平、凹兩面，光源強時用平面，較暗時用凹面，需要強光時，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時，將聚光器降低，或光圈適當縮小。

(3)將待觀察的標本置載物臺上，載物臺上有固定的裝置固定標本。通過載物臺調節(jié)旋鈕將標本移至鏡筒下方。轉動粗準焦螺旋使鏡筒下降至物鏡 鏡接近標本。于轉動粗準焦螺旋的同時，需俯身在鏡旁仔細觀察物鏡與標本之間的距離。

(4)調節(jié)目鏡之間距離，雙眼分別于左、右目鏡中觀察，待雙眼視野重合，同時左手轉動粗準焦螺旋，使鏡筒徐徐上升以調節(jié)焦距，使視野內(nèi)的物像看到時即停，再調細準焦螺旋，至標本清晰為止。

(二)物鏡的使用

顯微鏡一般具有三個物鏡，即低倍、高倍及油鏡，固定于物鏡轉換盤孔中。觀察標本時，使用低倍物鏡，此時，視野較大，標本較易查出，但放大倍數(shù)較小(一般放大100倍)，較小的物體不易觀察其結構。高倍物鏡放大的倍數(shù)較大(一般放大400倍)，能觀察微小的物體或結構。油鏡放大倍數(shù)可達1000倍，用來觀察細菌。普通人使用低倍物鏡即可。

(三)低倍、高倍、油鏡頭的識別

(1)標明放大倍數(shù)10×、40 ×、100 x，或10/0.25、40/0.65、 100/1.30。

(2)低倍鏡最短，高倍鏡較長，油鏡最長。

(3)鏡頭前面的鏡孔低倍鏡最大，高倍鏡較大，油鏡最小。

(4)油鏡頭上常刻有黑色環(huán)圈，或“Oil"或“油”字

(四)低倍鏡換高倍鏡的使用方法

(1)光線調好后，捻轉載物臺調節(jié)旋鈕尋找需要觀察的標本。

(2)如標本的體積較小，不能清楚查看其構造因而不能確認時，則將標本移至視野中央，再旋轉高倍物鏡于鏡筒下方。

(3)旋轉細準焦螺旋至物象清晰為止。

(4)調節(jié)聚光器及光圈，使視野內(nèi)的物像達到最清晰的程度。

(五)油鏡的使用方法

(1)將光線調至最強程度(聚光器提高，光圈全部開放，亮度調節(jié)旋鈕或光源放至最大）。

(2)將標本固定在載物臺上，先把低倍鏡調至視野最亮，并找到標本視野的適當位置，然后才能換用油鏡。

(3)轉動粗準焦螺旋使鏡筒上升，滴香柏油1小滴(不要過多，不要涂開)于物鏡正下方標本上。

(4)轉動物鏡轉換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。

(5)俯身鏡旁側面，在肉眼的觀察下，轉動粗準焦螺旋使油鏡頭徐徐下降浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。但勿使兩者相碰，防止損傷鏡頭或玻片。

(6)慢慢轉動粗準焦螺旋，使油鏡頭徐徐上升至見到標本的物象為止。

(7)轉動細準焦螺旋，使視野物象達到最清晰的程度。

(8)左手徐徐移動載物臺調節(jié)旋鈕，并轉動細準焦螺旋以觀察標本。

(9)標本觀察完畢后，轉動粗準焦螺旋將鏡筒升起，取下標本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈，再用干凈的擦鏡紙蘸少許二甲苯擦拭鏡頭，最后用干凈的擦鏡紙將鏡頭上的二甲苯擦去。注意在擦鏡紙擦拭時，要求順著一個方向旋轉擦拭，不能兩個方向來回擦。

(六)觀察

初學者應先用低倍鏡觀察，這是因為低倍鏡視野的實際范圍最大，易于發(fā)現(xiàn)目的物，將標本玻片放在載物臺上(注意標本朝上)，并使標本位于物鏡的正下方，轉動粗準焦螺旋，同時從側面觀察，待物鏡下降到標本約0.5厘米時，開始由目鏡觀察，同時用粗準焦螺旋升起鏡筒，直到出現(xiàn)物象后，改用細準焦螺旋，上下微微轉動，仔細調節(jié)焦距，直至最后獲得清晰的物象為止。如此時視野里所觀察到的部位不理想時，可利用載物臺調節(jié)旋鈕將最適合的部位移動到視野中央。

由低倍鏡轉換到高倍鏡時，一定要從側面注視，以防低倍鏡未對好焦距而造成鏡頭與玻片相撞，另外要用手指捏住轉換器下面的金屬盤使之旋轉，而不得用手指捏住物鏡來轉動，否則長期使用后，會使光軸歪斜。調節(jié)光圈和聚光鏡，使亮度適中，再仔細轉動細準焦螺旋，調節(jié)焦距，獲得清晰物象。

細菌或其他標本的細微結構，都需要用油鏡觀察，由于油鏡的工作距離很短(0. 19毫米左右)，故使用時必須特別小心。在低倍鏡找到要觀察的部位以后，將鏡筒升高，在標本上加一滴香柏油，轉換鏡頭，從側面注視，用粗準焦螺旋將鏡筒小心下降，使油鏡浸入油滴，直到幾乎與標本接觸為止(注意切勿壓在標本上，以免壓碎玻片，甚至損壞油鏡鏡頭)。從目鏡觀察，先用粗準焦螺旋徐徐升起(只準上升鏡筒，不能向下調節(jié))，當視野中有模糊的標本物象時，改用細準焦螺旋調節(jié)，直到標本物象清晰為止，如轉動粗準焦螺旋已使鏡頭離開油鏡，應重新調節(jié)，直至調到看清物象為止。

三、魚體鏡檢的正確操作

用顯微鏡、解剖鏡、放大鏡對魚病進行檢查，簡稱鏡檢。鏡檢是在魚病情況比較復雜，僅憑肉眼檢查原則上是不能作出正確診斷時而開展的更進一步的檢查工作。在一般情況下，魚病往往錯綜復雜，很多病原體十分細小，有必要進行鏡檢。

鏡檢的方法是將從病變部位取少量的組織或粘液置于載玻片上，如是體表和鰓的組織或粘液，應加上少量普通潔凈水或生理鹽水；是內(nèi)臟組織則用生理鹽水或潔凈水，然后蓋上蓋玻片，并稍加壓平，于顯微鏡下進行觀察，先用低倍鏡檢查，當發(fā)現(xiàn)有蟲體構造看不準時，再換中倍鏡或高倍鏡檢查。

玻片從左到右，移下一小格，再從右往左，自上而下周而復始地移動，直至整個玻片看完，記下寄生蟲的種類和數(shù)量。少量寄生蟲并不引起魚病，但若隨意在一個玻片上觀察3個視野記數(shù)，平均每個視野有20個左右，就應引起注意。

總之，在整個檢查過程中，應把檢查到的情況，結合魚病流行季節(jié)、各階段發(fā)病規(guī)律進行分析比較，找出其原因，作出診斷，然后根據(jù)各種病的防治方法，對癥下藥，及時總結。

四、檢查時應注意的事項

1.用活的病魚或剛死的病魚。迅速送到實驗室進行檢查。因時間稍長，魚體腐爛就很難正確論斷。

2.取樣時要保持魚體濕潤。因魚體干燥后，病魚的癥狀也會變得不明顯。因此，應將病魚裝在帶有原飼養(yǎng)水的桶或盆里拿出檢查。

五、檢查方法

（1）載玻片法

取下一小塊病灶組織或一小滴內(nèi)含物，放在干凈的載玻片上，滴入一小滴清水或鹽水，蓋上蓋玻片，輕輕地壓平，先在低倍顯微鏡下檢查，分辨不清或可疑的可再用高倍鏡檢查。

（2）玻片壓縮法

用兩片厚度約為3～4毫米，大小約6×12厘米的玻片，先將要檢查的組織或者是器官的一部分以及粘液等，放在其中一片玻片上，滴上適量的清水或生理鹽水，用另一片玻片將其壓成透明的薄層，即可放到解剖鏡或低倍顯微鏡下檢查。

六、鏡檢應該重點檢查的組織器官

魚的各個組織器官、血液都可能有病原體存在，但在生產(chǎn)實踐中，特別應該重點檢查的部位是粘液、鰭條、鰓、腸胃、肝臟等部位。

（1）粘液

魚的體表粘液中，往往有許多肉眼看不見的病原體，如顫動隱鞭蟲、口絲蟲、車輪蟲以及吸蟲囊蚴等，粘孢子蟲和小瓜蟲的孢囊肉眼也不易區(qū)分。在檢查時，先用解剖刀刮取魚體表的粘液，然后按照鏡檢方法將粘液放到顯微鏡或解剖鏡下觀察。

（2）鰓

用剪刀從左右鰓各剪取第一鰓兩端和中間三個點的鰓組織，放在載玻片上，滴入適量的清水，蓋上蓋玻片在顯微鏡下觀察；然后再刮取鰓片上的粘液或可疑物，同樣按上述方法進行檢查。可發(fā)現(xiàn)鰓隱鞭蟲、波豆蟲、車輪蟲、黏孢子蟲、膚孢蟲、斜管蟲、小瓜子蟲、杯體蟲、毛管蟲、指環(huán)蟲等寄生蟲。魚的鰓是特別容易被病原體侵襲寄生的部位，取鰓組織時，最好從每一邊鰓的第一片鰓片接近兩端的位置剪取一小塊，寄生蟲大多在鰓小片的這兩個位置上寄生

檢查粘細菌可取鰓腐爛處旁邊的組織，取下后放載玻片上，加清水靜置10—15分鐘后檢查(因為粘細菌離開寄主后會聚集在一起)，容易看到粘細菌。

（3）鼻腔

用吸管吸取少許清水注入鼻孔中，再用鑷子或微吸管從鼻腔內(nèi)取少許內(nèi)含物或將液體吸出，放入培養(yǎng)皿中(要多吸幾次)，或置于顯微鏡下檢查，用低倍顯微鏡或解剖鏡觀察。可發(fā)現(xiàn)黏孢子蟲、車輪蟲等原生動物。

（4）血液

從鰓動脈或心臟取血。血液鏡檢可以發(fā)現(xiàn)錐體蟲等原生動物寄生蟲。

（5）口腔

用鑷子刮取上下顎的粘液在顯微鏡下檢查。若是檢查白頭白嘴病，刮下吻部周圍的粘液也要過10—15分鐘后再觀察。

（6）眼

用彎頭鑷取出魚眼睛，放于玻片上，剖開鞏膜，釋出玻璃體和水晶體，在低倍顯微鏡下或解剖鏡下檢查，可發(fā)現(xiàn)雙穴吸蟲的囊蚴和黏孢子蟲等。

（7）體腔（腹腔）

打開體腔，剖開魚體，取出所有內(nèi)臟后用潔凈水或生理鹽水自上而下沖洗腹腔，用平皿盛裝沖洗液，稍加攪動，倒去上層清水，下沉水與沉淤物用吸管吸到載玻片上，逐次檢查。發(fā)現(xiàn)有白點，用解剖鏡或顯微鏡檢查，可發(fā)現(xiàn)黏孢子蟲、微孢子蟲、絳蟲等成蟲和囊蚴。

（8）肌肉

剝?nèi)ヴ~體皮膚后，先在前、中、后等部分取一小片肌肉放在載玻片上，蓋上蓋玻片，輕輕壓平，在顯微鏡下觀察，再用壓縮法檢查，可發(fā)現(xiàn)黏孢子蟲、復殖吸蟲、絳蟲和線蟲等幼蟲。

（9）腸胃

檢查魚的腸胃，首先應把腸道外壁上所有的脂肪組織盡量去除干凈，否則不易進行觀察。目檢腸道外形，若腸道外壁上有許多小白點，通常是粘孢子蟲或微孢子蟲的孢囊。肉眼檢查完后，一般是將腸道分為前腸、中腸和后腸三段，分別進行檢查。用尖剪在與腸平行的方向剪開一個小切口，用鑷子從切口取一小滴內(nèi)含物放載玻片上。滴上一小滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，壓片鏡檢，可發(fā)現(xiàn)鞭毛蟲，變形蟲、黏孢子蟲、微孢子蟲、球蟲和纖毛蟲等原生動物。六鞭毛蟲、變形蟲和腸袋蟲一般寄生在后腸近肛門3～7厘米處，而復殖吸蟲、絳蟲、線蟲和棘頭蟲等通常在胃、前腸或中腸寄生

檢查時除了注意發(fā)現(xiàn)較大型的寄生蟲外，還應注意腸內(nèi)壁上有無白色點狀物或瘤狀物，有無潰爛發(fā)紅發(fā)紫的現(xiàn)象。如果有小白點，壓破其孢囊，往往可以看到大量的粘孢子蟲，有時也會是微孢子蟲。青魚腸里潰爛或有白色瘤狀物，往往是球蟲的大量寄生。如果發(fā)紅發(fā)紫，則一般是細菌性腸炎。

（10）肝臟

檢查魚的肝臟，先肉眼觀察肝臟的顏色有無變化，有無潰爛、病變、白色和腫瘤等。在肝的表面，有時可發(fā)現(xiàn)復殖吸蟲的孢囊或蟲體，有的則有粘孢子蟲、微孢子蟲或球蟲形成的孢囊的小白點。然后取少許肝組織，放在載玻片上，蓋上蓋玻片，輕輕壓平，先在低倍鏡下觀察，然后再用高倍鏡觀察，通常在病魚肝臟上可發(fā)現(xiàn)粘孢子蟲，微孢子蟲等的孢子或胞囊，有時還有吸蟲的囊蚴。

（11）膽囊

魚的膽囊壁和膽汁，除用載玻片法在顯微鏡下檢查外，還要用壓展法或放在培養(yǎng)皿里用解剖鏡或低倍顯微鏡觀察。膽囊內(nèi)可發(fā)現(xiàn)六鞭毛蟲、黏孢子蟲、微孢子蟲、復殖吸蟲和絳蟲幼蟲等。

取膽囊時要特別小心，切勿弄破，取出后放培養(yǎng)皿中，目檢后取一部分膽囊壁放載玻片上，蓋上蓋玻片，壓平，放顯微鏡下觀察。檢查膽汁時用吸管吸取膽汁，在鏡下作載玻片法檢查。

（12）鰾

檢查魚鰾用載玻片法和壓展法同時檢查，可發(fā)現(xiàn)復殖吸蟲、線蟲、黏孢子蟲及其胞囊。

七、鏡下觀察病原體的計數(shù)方法
鏡檢時，除了解病原體的種類和對寄主的感染率(%)外，還要了解它們對寄主的感染強度，因而對每種病原體的數(shù)量要進行統(tǒng)計。

方法與標準是：細菌：腸炎、爛鰓、蛀鰭、赤皮病、癤瘡等按表現(xiàn)的癥狀，用文字描述。

真菌：水霉、鰓霉，按照對器官的比例大小，用文字和數(shù)字說明。

原生動物：這類病原體用肉眼難于觀察到，鏡下觀察一般也不可能逐個數(shù)清，因而采用估計法以“+”來表示，“+”表示有，“++”表示多，“+++”表示很多。

其中：

鞭毛蟲、變形蟲和孢子蟲的孢子，在高倍鏡一個視野下有1—20個蟲體記“+”號，20—5b個蟲體記；“++”號，蟲體51個以上記“+++”號，并注明是以孢子計算的。

纖毛蟲、吸管蟲莊低倍鏡一個視野下有1—50個記“+”號，51—100個記“++”號，100個以上記“+++”號。

小瓜蟲可按孢子蟲的標準統(tǒng)計。

以上每—種統(tǒng)計數(shù)，都以任取放大同倍數(shù)的3個視野中觀察到蟲體的均值表示。

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