第七章潔凈區的確認和監測

第一節潔凈區和空氣凈化設備確認

第七十六條潔凈區和潔凈空氣設備（如單向流單元、RABS和隔離器）的設計必須符合相應的潔凈度要求，包括達到“靜態”和“動態”的標準。應當按規范要求進行確認，其確認應當與環境監測明確區分進行。

第七十七條潔凈室和潔凈空氣設備的確認可以參考ISO 14644系列標準。確認應當至少包括以下項目：

（一）過濾系統檢漏和完整性測試。

（二）風量和風速（1）。

（三）壓差檢測。

（四）氣流流型測試。

（五）懸浮粒子監測。

（六）沉降菌、浮游菌和表面微生物檢測。

（七）溫度測量。

（八）相對濕度測試。

（九）泄漏測試。

（十）自凈測試。

注：（1）A級潔凈區應當進行風速測試。其他級別潔凈區的風速測試應當基于風險評估決定，且在CCS中進行描述。用于最終滅菌產品灌裝的區域、作為A級和RABS背景的區域等，采用單向流送風時需要進行風速測試。對于非單向流的區域，可用自凈時間測試來代替風速測試。

第七十八條潔凈區級別確認是潔凈區確認的一部分。潔凈區的級別確認時應當分別測量≥0.5μm和≥5μm的顆粒的總數。測試需要在“靜態”和“動態”操作環境中進行。級別確認活動應當避免對工藝或產品質量造成任何影響。初始級別確認建議在模擬操作期間進行，重新級別確認建議在模擬操作期間或無菌工藝模擬試驗期間進行。

各潔凈級別懸浮粒子的標準規定如下表：

級別

懸浮粒子數最高限度

≥0.5μm/m3

懸浮粒子數最高限度

≥5μm/m3

靜態

動態

靜態

動態

A

3520

3520

不作規定（1）

不作規定（1）

B

3520

不作規定（1）

2930

C

2930

D

不作統一規定（2）

不作統一規定（2）

注：（1）如有CCS或歷史趨勢數據依據，可考慮將≥5μm顆粒總數作為分級的參考標準。

（2）D級的動態限度不作統一規定。企業應當根據風險評估和日常監測的數據確定動態限度。

第七十九條潔凈區級別確認時，測試取樣點位置及最低數量應當符合ISO 14644（第1部分）要求。對于無菌生產區及背景環境（即A級區和B級區），應當考慮增加額外的取樣點。應當根據生產操作的具體情況和風險評估確定關鍵生產區的測試取樣點，評估應當包括灌裝點和膠塞加料盤等在內的所有關鍵生產區域。

第八十條單向流系統的確認方案應當明確送風速度的測量要求（包括測量位置），其工作區域應當均勻送風，風速指導值為0.36—0.54m/s。單向流系統的氣流可視化研究應當與風速測量相關聯。

第八十一條潔凈區確認時應當對微生物進行測定。根據潔凈度級別、氣流可視化研究結果、生產操作情況以及風險評估，確定取樣點的位置和數量。測試需要在靜態及動態操作環境中進行，采樣方法不應當對生產操作引入污染風險。

各潔凈級別微生物監測的標準規定如下表：

級別

空氣采樣

CFU/m3

沉降碟（直徑90mm）

CFU/4小時（1）

接觸碟（直徑55mm）

CFU/碟

A

無生長

B

10

5

5

C

100

50

25

D

200

100

50

注：（1）沉降碟應當充分暴露在環境中，單個沉降碟的暴露時間不得多于4小時，同一位置可使用多個沉降碟連續進行監測并累積計數。應當基于回收率研究確定單個沉降碟最長暴露時間，以防沉降碟培養基出現脫水干燥。

第八十二條潔凈室與潔凈空氣設備的再確認應當根據規定的程序執行，再確認應當至少包括以下內容：

（一）潔凈區級別確認（懸浮粒子數）。

（二）終端過濾器的完整性。

（三）風量測量。

（四）房間之間的壓差確認。

（五）風速測試。

第八十三條潔凈區應當定期進行再確認。A級和B級再確認的最長時間間隔為6個月。C級和D級再確認的最長時間間隔為12個月。設備、設施、運行方式發生變更或潔凈區空調系統關閉重啟時，也應當適當考慮進行再確認。

第二節環境和人員監測

第八十四條環境監測是CCS的重要部分，用于監測降低微生物和微粒污染風險的控制措施。通常由以下元素組成：

（一）懸浮粒子數。

（二）微生物。

（三）溫度、相對濕度和其他監測項目。

應當綜合考慮上述監測結果，以確認所監測系統的設計、驗證和操作等是否符合要求。

第八十五條監測結果應當用于日常批次放行、產品質量回顧分析或調查。應當根據產品和工藝類型（最終滅菌工藝和無菌生產工藝）確定監測結果對其影響的關鍵程度。

第八十六條應當結合CCS建立監測規程，對懸浮粒子和微生物等進行監測，并有相應記錄，以達到以下目的：

（一）確保潔凈區或潔凈空氣設備按照其設計和法規要求持續提供符合要求的潔凈環境。

（二）能有效捕捉到環境偏離限度的情況，及時調查并評估產品質量風險。

第八十七條應當基于風險評估建立環境監測規程，確定取樣位置、監測頻率、監測方法，以及微生物的培養條件，取樣方法應當避免對生產活動造成污染。

風險評估的因素包括工藝和產品知識、廠房、設備、操作步驟及其關鍵程度、級別確認和日常監測數據，以及環境中分離出的典型微生物等相關信息。關鍵區域監測位置的風險評估還應當考慮氣流可視化研究結果等。

風險評估應當定期回顧，以確保環境監測規程持續有效。

第八十八條潔凈區、潔凈空氣設備和人員的日常監測應當在“動態”條件下進行，并貫穿關鍵操作的全過程，包括設備組裝操作。

第八十九條應當根據產品及操作的性質制定溫度、相對濕度等參數，這些參數不應當對潔凈區（如A/B級）潔凈度造成不良影響。

第九十條A級潔凈區的監測應當符合以下要求：

（一）應當能夠證明關鍵操作過程中始終符合無菌操作的環境條件要求。

（二）監測位置應當包括所有對無菌設備表面、容器、密封件和產品具有高污染風險的位置。

（三）監測取樣點（包括取樣設備放置的位置、高度、朝向等）應當合理，以確保監測結果可靠。

第九十一條應當制定適當的懸浮粒子和微生物監測警戒限度和糾偏限度，并對持續監測數據趨勢進行定期回顧。

應當制定文件明確規定監測結果超標時糾偏的詳細措施。應當調查監測超標的根本原因，并評估對產品（包括在數據監測和報告期間生產的批次）的潛在影響。

本附錄規定了懸浮粒子和微生物監測的最高糾偏限度，企業可以根據產品和操作性質、監測數據趨勢及CCS制定更嚴格的糾偏限度。

第九十二條應當制定文件明確規定趨勢分析的方法，趨勢分析應當至少包括：

（一）超出糾偏限度或警戒限度的次數增加。

（二）連續超出警戒限度。

（三）可能具有共同原因的、定期但孤立的超出糾偏限度（如總是在計劃的預防性維護之后出現單個點的偏離）。

（四）微生物類型、數量及優勢菌群的變化。應當特別注意采集到的可能反映環境惡化或失控的微生物或難以控制的微生物（如形成孢子的微生物、霉菌）。

微生物種群、數量以及特定優勢微生物的變化。應當特別注意采集到的可能反映環境失控、潔凈度惡化或難以控制的微生物（如形成孢子的微生物和霉菌）。

第九十三條各潔凈級別懸浮粒子環境監測標準（最高糾偏限度）規定如下表：

級別

懸浮粒子數最高限度

≥0.5μm/m3

懸浮粒子數最高限度

≥5μm/m3

靜態

動態

靜態

動態

A

3520

3520

29

29

B

3520

29

2930

C

2930

D

不作統一規定（1）

不作統一規定（1）

注：（1）表中未規定D級動態監測標準，企業應當基于風險評估和日常監測數據制定合適的動態監測標準。

潔凈區的懸浮粒子在經確認的短暫“自凈”（自凈時間指導值：少于20分鐘）后，應當達到上表中的“靜態”標準。

由于電子噪聲、光散射、偶然損失等情況，A級區內的粒子計數，有時會被判定為計數錯誤，尤其是當量直徑≥5μm的粒子。然而，連續的或者有規律的計數發現低水平結果表明可能存在污染事件，應當進行調查。此類事件可能是空調送風系統的早期故障、設備故障引起，也可能是設備組裝和不良常規操作所導致。

第九十四條在關鍵操作的全過程中，包括設備組裝操作，應當對A級潔凈區進行懸浮粒子持續監測。

第九十五條A級潔凈區監測的頻率及取樣量，應當能夠及時發現所有人為干預、偶發事件及任何系統的損壞。采樣流速應當達到28L/min（1ft3/min）以上，系統應當按一定頻率將單個結果與警戒限度和糾偏限度進行對比，頻率的設定應當能夠及時發現并反饋潛在的偏離情況，超過警戒限度應當觸發報警。操作規程應當詳細說明報警時應當采取的措施，包括考慮額外的微生物監測。

第九十六條在B級潔凈區可采用與A級潔凈區相似的監測方法?？筛鶕﨎級潔凈區對相鄰A級潔凈區的影響程度，調整采樣頻率和采樣量。

第九十七條應當對塵埃粒子計數器（包括采樣管）進行確認。采樣管應當采用適宜的管徑和彎曲半徑，長度通常應當不超過1米，并盡量減少彎曲次數。在確認級別時，應當使用采樣管較短的便攜式塵埃粒子計數器。在單向流系統中，應當采用等動力學取樣頭。取樣頭應當具有適當的朝向，并盡可能地靠近關鍵位置，以確保采樣具有代表性。

【塵埃粒子計數器】

第九十八條當生產操作中使用物料（如可能引起生物、化學或放射性危害的活生物、粉末狀產品或放射性藥物）可能對監測產生影響時，應當考慮選擇適當的監測方法。

第九十九條生產過程中的污染（如活生物、粉末狀產品或放射危害）可能損壞塵埃粒子計數器時，應當在設備調試操作和模擬操作期間進行測試。操作規程中應當明確規定模擬操作的執行頻率。應當制訂合理的監測頻率和策略，以證明暴露風險前后的環境潔凈度。

第一百條使用自動化系統進行監測時，采樣量通常取決于所用系統的采樣速率。日常監測的采樣量可與潔凈級別確認時的空氣采樣量不同，操作規程中應當詳細說明監測采樣量。

第一百零一條應當對微生物進行動態監測，評估無菌生產的微生物狀況。監測方法有沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法（如棉簽擦拭法、接觸碟法）等。動態取樣應當避免對A級、B級氣流流型造成不利影響。對表面和操作人員的監測，應當在操作完成后進行。

【浮游菌采樣器】

微生物動態監測應當貫穿于產品可能會受到污染的關鍵操作過程（如無菌組裝、無菌操作、灌裝、凍干上料等）。

第一百零二條各潔凈級別微生物動態監測標準（最高糾偏限度）如下：

級別

浮游菌

CFU/m3

沉降菌（90mm）

CFU/4小時（1）

表面微生物

接觸（55mm）

CFU/碟（2）

5指手套

CFU/手套

A

無生長（3）

B

10

5

5

5

C

100

50

25

D

200

100

50

注：（1）當采用沉降菌采樣法對A級和B級區進行監測時，應當貫穿操作全過程（包括設備組裝操作）。沉降碟應當充分暴露在環境中，單個沉降碟的暴露時間不得多于4小時，同一位置可使用多個沉降碟連續進行監測并累積計數。應當基于回收率研究等驗證結果確定單個沉降碟最長暴露時間，以防對所用培養基適用性產生不利影響。

應當通過質量風險管理確定C/D級潔凈區監測的沉降碟暴露時間（最長4小時）以及采樣頻率。

（2）接觸碟限度適用于A級和B級區內的設備、房間和潔凈服表面監測。

（3）特別需要注意的是，A級區出現的任何長菌均應當進行調查。

第一百零三條在關鍵操作的全過程中，包括設備組裝操作，應當對A級潔凈區進行連續微生物監測（如浮游菌或沉降菌采樣）。應當基于無菌工藝的風險考慮是否在B級使用類似的方式進行監測。監測應當能夠捕獲所有干預、瞬時事件和任何的系統惡化，并應當避免任何由監測操作造成的風險。

第一百零四條未進行生產的潔凈區(如消毒后、生產前、批次生產結束后)，及未使用的相關區域，也應當進行微生物監測，以識別可能影響潔凈室控制的潛在污染事件。如出現污染，可增加取樣監測以確認糾正措施(如清潔和消毒)的有效性。

第一百零五條應當對A級、B級潔凈區人員進行微生物監測。根據人員活動情況、與關鍵區域的接近程度，以及風險評估結果，確定人員監測的位置、類型和頻率。操作過程中應當以適當時間間隔對人員進行采樣，采樣方式應當避免對操作產生不利影響。人員監測應當特別關注以下方面：

（一）人員進行關鍵干預操作后，應當對其手套進行取樣。應當根據關鍵干預操作的具體情況確定是否對潔凈服進行取樣，并按規定執行。

（二）人員退出B級潔凈區時，應當對手套和潔凈服進行取樣。

（三）如關鍵干預后進行了手套取樣，應當在繼續操作之前更換外層手套。如關鍵干預后進行了潔凈服取樣，則應當在進一步活動之前更換潔凈服。

第一百零六條當采用人工操作（如無菌配制或灌裝）的生產方式時，應當加強對A級、B級潔凈區人員潔凈服的微生物監測，并在CCS中予以說明。

第一百零七條如日常監測由生產人員進行，質量部門人員應當進行監督。

第一百零八條企業應當考慮采用合適的替代監測系統（如快速方法）以加速發現微生物污染事件，降低產品風險。此類快速自動化監測方法應當經驗證后使用，驗證應當證明與目前已建立的方法具有等效性或優越性。

第一百零九條應當制定操作規程詳細說明微生物取樣方法、操作流程，以及監測結果的正確判定。取樣方法應當有微生物回收率的支持性數據。

第一百一十條 A級或B級潔凈區檢測到的微生物應當鑒定到種，并應當評估微生物對產品質量（涉及的所有批次）和總體控制狀態的潛在影響。

以下情形需考慮對C級和D級潔凈區檢測到的微生物進行鑒定：

（一）微生物監測結果超過警戒限度或糾偏限度。

（二）分離出可能導致失控、潔凈度惡化的微生物。

（三）分離出難以控制的微生物（如形成孢子的微生物、霉菌）。

上述區域微生物鑒定頻次應當合理，以保證充分掌握潔凈區典型微生物情況。

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