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瑞喵舒?抗體流調報告:基于902例貓科動物免疫效價評估

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瑞喵舒?抗體流調報告:

基于902例貓科動物免疫效價評估

作者:紀亞楠

摘要

為了解貓咪初免瑞喵舒后抗體滴度水平及分析臨床檢測抗體與臨床實際保護力的關系,本調查于2024年7月至2025年2月收集全國多個地區多家寵物醫院貓咪首免完瑞喵舒后21d的血清樣本共計902份,共分兩個流調同時進行。

流調一單獨使用院內免疫熒光機器檢測抗體,共收集728份抗體報告。流調二在臨床使用院內免疫熒光機器檢測后,同一血清樣本送三方實驗室檢測抗體,共收集174份。對流調一及流調二數據分別進行統計分析。

結果:(1)流調一中貓細小病毒(FPV)合格率為93.4%(680份),皰疹病毒(FHV)合格率63.7%(464份),杯狀病毒(FCV)合格率73.1%(532份)。(2)流調二中FPV臨床/三方實驗室抗體合格率分別為96.6%/100%,FHV臨床/三方實驗室抗體合格率分別為63.2%(110份)/86.2%(150份),FCV抗體臨床/三方實驗室抗體合格率分別為80.5%(140份)/92%(160份)

綜合分析表明,瑞喵舒首免完成后對FPV、FHV、FCV三種核心傳染病具有良好的臨床保護力。

關鍵詞:瑞喵舒,免疫,抗體,保護

1.引言

貓泛白細胞減少癥、貓上呼吸道疾病(FURTD)是獸醫臨床的常見疾病,多由病毒引起,其中主要的病原為貓細小病毒(FPV)、皰疹病毒(FHV)和杯狀病毒(FCV),對貓的健康造成威脅,臨床上的預防手段以注射疫苗為主。之前疫苗面臨的問題主要集中在FHV與FCV臨床檢測抗體水平較低。有許多因素會造成此種情況出現如疫苗所使用毒株是否為新的流行毒株。三種病毒中FPV與FHV較穩定不易變異,而FCV容易變異[1],且在1998年發現了第一株高致病性毒株FCV-VSD株,可導致具有高死亡率的全身性疾病[2-4]。先前的商品化疫苗對于FCV并不能提供完整的保護,這也導致許多不同的田間毒株的交叉反應有限,在理想情況下,疫苗使用的毒株應適應目前當地所流行傳播的田間株[5,6]。一項研究發現,實驗貓使用老毒株的疫苗免疫后抗體的中和能力為11.5%(F9)和64.1%(255),而使用新毒株的疫苗免疫后抗體的中和能力為70.5%(G1)和89.7%(431)[7]。因此應對不斷變異的FCV及對FCV高致病性毒株具有交叉保護也是臨床上對疫苗的新需求。除此之外FPV、FHV、FCV不同病毒主導的免疫方式、臨床檢測手段、疫苗中所含抗原量的高低也會不同程度的影響臨床檢測后呈現的抗體水平。

為此,本報告通過對全國免疫瑞喵舒后的臨床抗體報告數據、臨床抗體報告與三方實驗室的抗體報告數據平行對比進行分析以探討瑞喵舒真實臨床保護力及影響臨床抗體數據的因素,以期為臨床防護貓咪三種核心傳染病提供一定的數據參考。

2.材料和方法

2.1材料

2.1.1血清樣本

收集來自全國東西南北四個區域共計902份貓的血清樣本(見圖1),其中東南西北四個區分別收集139份、195份、154份、414份,圖1中紅色標記點均有血清樣本收集,其中以遼寧省、山東省、河南省、重慶市、上海市、浙江省、廣東省為主。


圖1.報告中血清樣本采集分布圖

2.1.2其他變量

實驗過程中共有10個免疫熒光機器品牌參與實驗,三方實驗室為具有CNAS認證的天津渤海農牧產業聯合研究院。不同地區,不同機器、充足的樣本量對于瑞喵舒免疫效果的臨床分析提供了足夠的科學數據支撐。

本實驗貓的納入標準是:

(1)體格檢查無異常;

(2)日齡>56d,體重>1kg;

(3)免疫2-3針瑞喵舒;

(4)檢測抗體時間為最后一次接種疫苗后15-21d。實驗中貓咪信息如表1所示。

表1.實驗中各變量信息表


2.2研究方案

流調一:全國分為東南西北四個區域同時進行臨床抗體結果收集,詳細記錄貓咪的年齡、品種、性別、體重、免疫情況、機器品牌及抗體報告,收集報告后對報告數據進行分析。

流調二(平行實驗):174份血清樣本在臨床使用免疫熒光機器進行抗體檢測后,同一血清樣本經冷凍后郵寄渤海農牧產業聯合研究院進行復核檢測,收集復核數據后與臨床數據進行對比分析。

3.結果

3.1FPV抗體結果

臨床檢測728份血清中,首免2針、3針后取樣血清分別為124份與604份。FPV抗體合格率為93.4%,不合格率為6.6%。詳細結果見表2:

表2.臨床檢測FPV抗體結果


平行實驗中,首免2針或3針后取樣血清共計174份。臨床檢測抗體與渤海農牧檢測抗體的對比結果見表3:

表3.臨床檢測與渤海農牧FPV抗體對比結果


3.2FHV抗體結果

728份血清中,首免2針、3針后取樣血清分別為124份與604份。FHV抗體合格率為63.7%,不合格率為36.3%。詳細結果見表4:

表4.臨床檢測FHV抗體結果


平行實驗中,首免2針或3針后取樣血清共計174份。臨床檢測抗體與渤海農牧檢測抗體對比結果見表5:

表5.臨床檢測與渤海農牧FHV抗體對比結果


3.3FCV抗體結果

728份血清中,首免2針、3針后取樣血清分別為124份與604份。FCV抗體合格率為73.1%,不合格率為26.9%,詳細結果見表6:

表6.臨床檢測FCV抗體結果


平行實驗中,首免2針、3針后取樣血清共計174份。臨床檢測抗體與渤海農牧檢測抗體對比結果見表7:

表7.臨床檢測與三方實驗室FCV抗體對比結果


4.討論

4.1注射疫苗后影響抗體產生的廣泛性原因

4.1.1母源抗體干擾

母源抗體(MDA)是母貓通過初乳傳遞給幼貓的抗體,幫助幼貓仔免疫系統尚未完全發育時抵抗病原體,然而母源抗體也可能干擾疫苗的免疫效果。

母源抗體對疫苗的干擾機制主要有兩種:

①中和疫苗抗原,阻止其刺激幼貓的免疫系統;

②抑制B細胞和T細胞的激活,降低疫苗的免疫效果。

Scott,F.W等人研究表明,母源抗體水平高的幼貓接種疫苗后,抗體效價顯著低于母源抗體水平低的幼貓[8]; Verena Jakel等人研究表明盡管進行了三次疫苗接種,36.7%的小貓仍未產生血清轉換。即使非常低的MDA滴度也明顯抑制了主動免疫的發展。大多數小貓在8和12周齡時顯示出顯著的MDA滴度;在一些動物中,MDA甚至在20周齡時仍被檢測到[9]。

4.1.2寄生蟲感染

寄生蟲感染主要通過以下幾種機制影響貓苗的抗體效價:

①抑制宿主的免疫反應,導致抗體產生不足[10];

②引發慢性炎癥干擾疫苗的免疫反應[11];

③與宿主競爭營養,導致宿主營養不良,進而影響免疫系統功能[12]。除此之外寄生蟲也可通過改變腸道菌群進而影響免疫系統功能。

4.1.3Felv和FIV感染

Felv和FIV是兩種貓咪免疫缺陷疾病,感染疾病后會顯著影響疫苗效價。Felv和FIV會直接破壞免疫細胞(T細胞和B細胞),導致免疫系統功能受損,從而使疫苗誘導的抗體生成不足。FeLV 和 FIV 感染的貓還更容易發生繼發感染,從而影響疫苗效力[13]。

4.1.4營養不良

注射疫苗后產生抗體的過程需要依賴B細胞、T細胞及其他免疫細胞。營養不良會減少B細胞的增殖和分化,抑制T細胞的功能,導致免疫細胞的數量和功能下降[14]。另外營養不良還可能導致促炎和抗炎反應失衡,擾亂免疫細胞之間的信號傳遞[15]。所以營養不良會通過多種途徑影響抗體的產生。

4.1.5應激

貓咪處于應激的狀態下也會導致貓苗抗體生成不足。Dhabhar,F.S[16],Padgett,D.A[17]等研究表明應激會激活下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA軸),導致皮質醇等應激激素的釋放抑制免疫系統的功能,從而影響抗體的產生。Day,M.J[18]等研究表明疫苗接種后,免疫系統需要產生特異性抗體,而應激會削弱這一過程,導致抗體生成不足。此外,應激還會通過改變腸道菌群平衡、導致貓咪食欲下降等方面間接影響抗體的生成。

4.2接種瑞喵舒后抗體結果分析

4.2.1FPV抗體結果分析

臨床收集的728份血清中,合格樣本680份,FPV不合格樣本為48份,其中有27份FHV、FCV抗體一項或兩項高(S5/S6),FPV抗體低(S1/S2);17份三項抗體整體偏低(S0/S1)。17份三項抗體整體偏低的貓咪經后續調查其中有5例貓咪偏瘦(BCS為2或3),其余12例中有6例進行疫苗補免,抗體仍未見明顯提升,高度懷疑貓咪本身由于4.1中某項或某幾項原因造成貓咪本身抗體生成不良。剩余27份中有8份FHV高,13份FCV高,6份FHV與FCV同時增高,但FPV低。這27只貓咪幾乎全部來自繁育場或者有流浪史,懷疑在接種前就有FHV和FCV的野毒感染。而FHV在嚴重感染情況下,病毒會在宿主免疫細胞中進行大量繁殖,攻擊中樞免疫器官,導致機體免疫力下降[19]。FCV在嚴重感染情況下會通過抑制I型干擾素信號通路,影響激活JAK-STAT信號通路從而影響B細胞的激活、增殖和抗體產生 [20]。所以貓咪在自身抗體生成能力弱(4.1中因素導致)或注射前有FHV和FCV野毒感染的情況下會影響自身抗體產生。

4.2.2FHV、FCV臨床檢測抗體結果分析

4.2.2.1貓疫苗類型及不同類型疫苗引發的免疫反應及檢測抗體的方式

貓咪疫苗主要分為弱毒苗和滅活苗。滅活苗主要通過引發體液免疫發揮作用,而細胞免疫反應較弱[21],主要通過外源性抗原呈遞途徑(MHC- II類分子)激活CD4+T細胞,但總體來說還是以體液免疫為主。

弱毒苗可同時引發細胞免疫和體液免疫。其中細胞免疫(CMI)主要由T細胞介導,其依賴于病原體在細胞內的復制和內源性抗原呈遞(MHC-I類分子)激活CD8+T細胞,弱毒苗因是活病毒可以實現以上途徑,而滅活苗卻無法實現。

體液免疫主要通過產生特異性抗體(IgG、IgM、IgA和IgE)發揮作用,其中IgG是血清中最主要的抗體類型,IgA主要存在于黏膜表面(如呼吸道)能夠阻止病毒通過黏膜入侵,在局部免疫中起重要作用。

目前抗體檢測方法主要有三種類型:快速診斷檢測(臨床上所用免疫熒光檢測,原理圖見圖2[22])和病毒中和實驗檢測(VNT)。免疫熒光檢測通常只能給出定性或半定量結果,在臨床檢測抗體時也只能檢測IgG,所以特異性較低。另一種是專業實驗室進行的病毒中和實驗(VNT,原理圖見圖3[22]),其是指病毒在活體內或細胞培養中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗,凡是能與病毒結合,并使其失去感染力的抗體稱為中和抗體(VNA),VNT因其能定量且特異性高也被認定為檢驗疫苗臨床保護力的金標準方法[23]。


圖2.快速診斷檢測機理示意圖


圖3.中和檢測機理示意圖

4.2.2FHV、FCV與FPV涉及免疫方式及相關抗體差異

貓苗中FPV的抗體只涉及IgG,所以臨床機器檢測的抗體結果可作為臨床保護力的指標。對FCV的保護已顯示與病毒中和抗體(VNA)和細胞免疫相關[24]。其中黏膜IgA水平比IgG水平有更強的保護相關性[25]。對FHV的感染,與其他α皰疹病毒感染一樣,細胞免疫比體液免疫對臨床保護更為重要[26],此外,作為呼吸道病原體,黏膜免疫在保護貓免受FHV感染中更為重要[27]。臨床檢測只能檢測IgG無法測定IgA及VNA,所以在平行實驗中臨床抗體檢測與三方實驗室結果差別較大,實驗室檢測部分結果與瑞喵舒上市階段所做攻毒保護實驗結果(見圖4)相一致。由此可見臨床檢測結果不能等同于中和抗體結果,所以臨床檢測抗體結果不能完全代表疫苗的臨床保護力。


圖4.瑞喵舒攻毒保護實驗數據圖

5.小結

1、瑞喵舒自2024年1月上市以來截止到2025年3月顯示批簽發總計為一百七十七萬頭份,臨床未發現正常免疫后由疫苗引起的嚴重不良反應及死亡案例,說明瑞喵舒安全性良好。

2、瑞喵舒首免程序完成后均可很好的預防FPV,且FPV臨床抗體檢測結果可以作為臨床保護力的參考標準,但需要特別注意會影響FPV抗體產生的因素。

3、渤海農牧抗體結果與攻毒保護實驗結果相一致,臨床也未接到成功接種瑞喵舒后感染FHV、FCV的案例,說明瑞喵舒程序完成后均可很好的預防FHV和FCV,且臨床檢測抗體結果不能完全代表疫苗的臨床保護力。

4、臨床免疫過程中可通過多種途徑如選擇含有本土流行毒株的高抗原疫苗、按照先驅蟲后免疫進行規范的免疫程序、無懼操作、不在FHV、FCV急性發作期進行免疫等降低各種因素對抗體生成的影響。

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