作者：寵物醫師網編委會

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自動化血液分析儀需聯合人工血涂片復核進行血小板計數，尤其針對存在出血性疾病的患寵。

摘要

人工血涂片評估對驗證自動化血小板計數至關重要，尤其在血小板減少癥（thrombocytopenia）診斷中。血小板評估是出血性疾病診療的首要環節，此類疾病多因血小板數量/功能缺陷（原發性凝血障礙）或凝血因子異常（繼發性凝血障礙）引起[1]。由于凝血障礙常為多因素致病，需綜合評估樣本采集技術、血小板聚集程度、估算血小板計數及形態學特征。

一、引言

血小板（舊稱血栓細胞）起源于骨髓中的巨核細胞，但大多數血小板并不在循環系統中，而是儲存在脾臟。

大多數犬貓的血小板壽命為4至6天，但在脾切除患者中可能發生變化。由于脾臟負責清除老化血小板，脾切除患者的血小板壽命可延長至8天[3]。

血小板在凝血的初始階段至關重要，其功能包括形成血小板栓、促進凝血因子結合以及抑制血管損傷部位的抗凝因子[1]。因此，血小板分析對評估出血性疾病患者具有重要意義。自動化血液分析儀能比人工方法更精準地評估血小板計數，但在凝血障礙疾病中各種“偽影”可能影響其準確性[2]。

二、樣本采集

正確采集與保存血液樣本是后續血液分析的基石。血小板計數應在樣本采集后5小時內進行 [2] 。

當血液形成凝塊時，凝血因子被激活，血小板被消耗；因此，需將血液采集至含抗凝管中，以評估血小板數量、形態及功能。制作血涂片和進行犬貓自動化血小板計數的首選抗凝劑是EDTA，EDTA可確保最佳染色效果和最小樣本稀釋。然而，據報道EDTA可能導致血小板聚集；將EDTA樣本預熱至37°C（98.6°F）可減少聚集[4,5] 。

在貓中，使用枸櫞酸鹽采血可能減少血小板聚集，但犬中無效[6-8]。需注意，枸櫞酸鹽采血管會使樣本稀釋10%，因此血小板計數需校正稀釋效應[3]。

此外，在血液樣本中添加阿米卡星也可解聚血小板團塊[9]。若無法立即進行全血細胞分析（CBC），建議冷藏樣本以增強血小板聚集。

送檢建議：應在采樣時制備2張未染色、自然風干的血涂片，并與血液樣本一同。血液樣本需恢復至室溫，并在放入血液分析儀前輕柔顛倒混勻[5,6]。

三、血小板評估

血小板聚集是導致血小板計數假性降低（假性血小板減少癥）的最常見原因。聚集通常歸因于采樣不當（如未及時將血液轉移至抗凝管、混勻不足或創傷性采血）[10]。體外血小板聚集可能發生在采血過程中，尤其是貓[3]。

若存在血小板聚集，則無法獲得準確的血小板計數。通常情況下，分析儀不會分類血小板團塊，但較小的團塊可能被誤計為白細胞[11]。維護良好的血液分析儀的自動化血小板計數（針對哺乳動物）比人工計數更準確。建議通過人工血涂片復查輔助自動化血小板計數，尤其是當報告的血小板減少癥低于檢測靈敏度下限（5000-20 000血小板/μL）時[2,3]。

步驟1：尋找血聚集小板

在低倍鏡下（10×或20×物鏡），掃描血涂片的羽狀邊緣及周邊區域以尋找血小板聚集（圖1A）。同時檢查涂片的其余區域，因為血小板聚集也可能出現在單層區（圖1B）。脫顆粒后，血小板可能與嗜堿性碎片難以區分（圖1C和1D）。

圖1. 犬血涂片（A）羽狀邊緣的血小板聚集團塊；200×，瑞氏-吉姆薩染色。（B）單層區內的血小板聚集；脫顆粒血小板聚集團塊位于（C）羽狀邊緣及（D）單層區。500×，瑞氏-吉姆薩染色。

步驟2：估算血小板數量

估算血小板是評估疑似血小板減少癥患者的重要初始方法，但操作者誤差和血小板在涂片中的分布差異可能導致結果波動較大[13]。此外，若觀察到大量或大型血小板聚集，涂片估算值可能假性偏低。

估算方法：在單層區的10個高倍視野（100×物鏡）中計數血小板，計算平均值，再乘以校正因子15 000（犬）或20 000（貓），即可得出每μL血小板的估算數量[13,14]。

步驟3：評估血小板形態

正常血小板呈圓形、無核，胞質淡藍色，內含大量小而圓至不規則形狀的粉紫色顆粒（圖2A）。激活時，血小板由圓形變為橢圓形，并伸出絲狀偽足（圖2B）。激活后顆粒常聚集于中央，易被誤認為細胞核。需注意與淋巴性白血病或循環性淋巴瘤患者的胞質碎片區分（圖2C）。前血小板（proplatelet）偶見，表現為細長形血小板[15]。

圖2.（A）犬血涂片單層區的血小板（箭頭）。（B）貓血涂片單層區的血小板，含活化血小板（框內）。（C）白血病患貓血涂片中的胞質碎片（框內）。（D）查理士王小獵犬血涂片中的巨血小板。500倍放大，瑞氏-吉姆薩染色。

血小板大小（以血液分析儀中的平均血小板體積MPV表示）存在種內和種間差異：

犬：血小板遠小于紅細胞（約7 μm，直徑2–4 μm）。

貓：血小板大小不一（2 μm至接近紅細胞大小，約6 μm）[10]。

MPV升高可能提示非免疫介導的再生性血小板減少或炎癥狀態下的血小板生成增加，也見于髓系腫瘤和FeLV陽性血小板減少癥患貓[3]。某些犬種（如查理士王小獵犬、諾福克梗、凱恩梗、秋田犬、比格犬）因β1微管蛋白基因突變導致血小板增大（圖2D）[16-18]。這些犬可能出現血小板減少（即巨血小板減少癥），但因血小板總量正常而無出血異常[19]。

血小板大小變化需結合臨床背景解讀。

血小板分布寬度（PDW）反映大小異質性，大血小板比率（P-LCR）表示大血小板比例。對于血小板減少癥患者，PDW和P-LCR可能是血小板生成增加的更敏感指標[3,20,21]。

四、凝血障礙

4.1 血小板減少癥

通常，血小板減少癥源于血小板生成減少、消耗增加或破壞增多。病因也可能是多因素的，常見于感染性疾病。在某些犬種（如靈緹犬、波蘭獵犬）及前文提到的巨血小板減少癥犬中，血小板計數的參考區間下限較低[16-19,22,23]。若血小板功能正常，當觀察到自發性出血時，可能提示病理性血小板減少癥（尤其是犬血小板計數低于30 000/μL或貓低于15 000/μL）。

4.2血小板增多癥

由于脾臟是血小板的儲存庫和清除場所，脾切除術后可能導致血小板增多持續數月。反應性血小板增多癥可繼發于炎癥、腫瘤、急性貧血、缺鐵性貧血或長春新堿治療。紅細胞碎片、胞質碎片、脂血、細菌和/或冷球蛋白可能干擾計數準確性，導致假性血小板增多癥。若排除上述原因且血小板計數持續升高（通常>100萬/μL），需考慮腫瘤性病變（如原發性血小板增多癥、副腫瘤綜合征），但這些情況較罕見[3]。

五、結論

血小板在凝血中起關鍵作用。自動化血液分析儀可評估血小板總量，但其結果并非絕對可靠。對于出血性疾病患者，應結合人工血涂片復查進行血小板計數。血涂片復查操作簡便、成本低，可識別血小板聚集等干擾因素，這些因素常導致自動化檢測結果準確性下降。

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文章來源|Today Sveterinary Practice

翻譯編輯|張秋雁

審 核|郭羽麗