2025年5月，胡瓊依副研究員在Blood【IF21.1，Q1】雜志在線發表題名為“Ruxolitinib Targets JAK-STAT Signaling to Modulate Neutrophil Activation in Refractory Macrophage Activation Syndrome.”——JAK-STAT信號通路靶向抑制劑蘆可替尼在難治性巨噬細胞活化綜合征中對中性粒細胞活化的調控研究的研究論文。

瑞金醫院風濕免疫科胡瓊依副研究員、賈錦超醫師、孫悅副研究員、滕佳臨主任醫師為論文的共同通訊作者；馬宇寧醫師、陳俠博士研究生、王孟燕醫師為論文的共同第一作者。

doi：10.1182/blood.2024024362.

巨噬細胞活化綜合征（MAS）是一種危重且致命的綜合征，其特征為失控的過度炎癥反應，屬于繼發性噬血細胞性淋巴組織細胞增生癥（HLH），是風濕性疾病，尤其是成人斯蒂爾病（AOSD）的嚴重并發癥，顯著危害了患者的生存。傳統上認為MAS是單核吞噬細胞系統異常增殖和活化的結果，盡管中性粒細胞在AOSD中扮演重要的致病角色，但其在MAS中的身份仍然未知。為此，研究者首先分析了AOSD-MAS患者的中性粒細胞和外周血單個核細胞（PBMC）的RNA-seq測序數據，發現中性粒細胞上調的差異基因顯著富集于先天免疫相關的通路。同時，在CpG誘導的繼發性噬血細胞性淋巴組織細胞增多癥（hemophagocytic lymphohistiocytosis, HLH）小鼠模型中使用中性粒細胞特異性抗體清除中性粒細胞能顯著降低炎癥因子水平，其效果和清除單核細胞的效果相當。另外，通過RNA-seq測序、流式細胞術及Olink數據分析研究者發現MAS患者中性粒細胞JAK-STAT通路激活，相關炎癥因子顯著升高。

進一步分析發現JAK1/JAK2與中性粒細胞功能相關基因呈強相關， JAK1/2抑制劑蘆可替尼已在HLH中證實其安全有效，然而在AOSD-MAS中的使用經驗僅在個別病例報道中描述。對此，研究者對該中心的10例難治性AOSD-MAS患者使用蘆可替尼進行治療，發現8例實現完全緩解且激素劑量得以快速減量，1例達到部分緩解，另有1例在激素減量過程中出現復發。所有患者的臨床癥狀、Pouchot評分和HScore顯著下降在首月即得到改善。Olink檢測到中性粒細胞活化相關細胞因子在治療后亦明顯下降。這些結果提示蘆可替尼可抑制MAS的過度炎癥反應，并可能有調節中性粒細胞的作用。

為進一步探索蘆可替尼對免疫細胞的影響，研究者收集了患者蘆可替尼治療前后的中性粒細胞和PBMC進行RNA-seq測序，KEGG分析發現蘆可替尼在轉錄組水平上影響了中性粒細胞NETosis。后續的原代細胞體外實驗證實治療后中性粒細胞NETs形成顯著減少，并且血清NETosis標志物顯著下降。利用NETosis缺陷（

Padi4

繼續使用GSEA分析治療前后的RNA-seq測序數據發現蘆可替尼影響了中性粒細胞的IL-6-STAT3通路以及PBMC的IL-6-STAT3和IL-2-STAT5通路，這些患者的血清中也被證實存在能激活白細胞STAT3和STAT5磷酸化的成分。繼而，在繼發性HLH模型中選擇性抑制STAT3或STAT5可減輕全身炎癥反應，降低NETosis標志物。

目前已知超過100個基因與HLH相關，其中11個致病基因的機制相對明確。然而，為何特定自身免疫性疾病患者會發生MAS仍不清楚。對這10例使用蘆可替尼治療的MAS患者進行WES測序發現12個JAK-STAT通路相關基因的VUS變異。功能學實驗證明其中

PDGFRB

PDGFRA

SOCS4

PIAS4

IL7R

IL27RA

IL12RB1

IL11RA

IL10RA

該研究揭示中性粒細胞在MAS中的重要致病作用，闡明蘆可替尼能通過廣泛抑制JAK-STAT信號通路調控中性粒細胞活化的機制，為臨床使用蘆可替尼治療難治性AOSD-MAS患者提供新的理論依據，并有望推動AOSD-MAS的基因靶向治療新策略。

Abstract

Macrophage activation syndrome (MAS) is believed to be the result of inappropriate proliferation and activation of the mononuclear phagocytic system. Adult-onset Still’s disease (AOSD) is characterized by neutrophil activation and a cytokine storm, which can lead to its severe and potentially life-threatening complication MAS. RNA sequencing revealed that neutrophils may play a distinct and enhanced role in innate immunity in AOSD patients with MAS (AOSD-MAS). In the CpG-induced secondary hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH) model, depletion of neutrophils significantly reduced cytokine levels, with effects comparable to monocyte depletion. Significant enrichment was observed in the type I/II interferon and JAK-STAT pathways in neutrophils from AOSD-MAS patients. Treatment of 10 refractory AOSD-MAS patients with ruxolitinib led to the resolution of inflammatory parameters and clinical symptoms. RNA sequencing and ex vivo assays confirmed that ruxolitinib suppressed aberrant NETosis and STAT3/STAT5 signaling. In vivo, PAD4 knockout further confirmed the pathogenic role of NETosis in secondary HLH model. Moreover, selective inhibition of STAT3 or STAT5 alleviated systemic inflammation. Ten functional variants were identified in genes related to the JAK-STAT pathway, although their clinical relevance requires further validation. These findings suggest the potential of ruxolitinib in achieving disease remission in refractory AOSD-MAS patients by broadly inhibiting JAK-STAT signaling and modulation of neutrophil activation and NETosis.

中文摘要

巨噬細胞活化綜合征（Macrophage activation syndrome, MAS）被認為是單核吞噬細胞系統異常增殖和活化的結果。成人斯蒂爾病（Adult-onset Still’s disease, AOSD）以中性粒細胞活化和細胞因子風暴為特征，MAS是其嚴重并發癥，可危及患者生命。RNA-seq測序顯示在并發MAS的AOSD患者（AOSD-MAS）中，中性粒細胞可能在先天免疫中活化并發揮獨特的作用。在CpG誘導的繼發性噬血細胞性淋巴組織細胞增多癥（hemophagocytic lymphohistiocytosis, HLH）模型中，清除中性粒細胞能顯著降低炎癥因子水平，其效果與清除單核細胞相當。在AOSD-MAS患者的中性粒細胞中觀察到I/II型干擾素及JAK-STAT通路顯著富集。對10例難治性AOSD-MAS患者使用蘆可替尼治療后，炎癥指標和臨床癥狀均得到緩解。RNA-seq測序和體外實驗證實蘆可替尼可抑制NETosis及STAT3/STAT5信號傳導。在體內實驗中，PAD4基因敲除鼠進一步證實了NETosis在繼發性HLH模型中的致病作用。此外，選擇性抑制STAT3或STAT5可減輕全身炎癥反應。研究者在JAK-STAT通路相關基因中鑒定出10個影響功能的變異，但其臨床意義仍需進一步驗證。這些發現表明，蘆可替尼能廣泛抑制JAK-STAT信號通路、調控中性粒細胞活化和NETosis，有望成為難治性AOSD-MAS患者的治療選擇。

作者

介紹

胡瓊依副研究員，主治醫師，碩士生導師，上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科；研究方向：自身免疫和自身炎癥性疾病的基礎和臨床研究。

滕佳臨主任醫師，碩士生導師，上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科；研究方向：自身免疫和自身炎癥性疾病的基礎和臨床研究。

孫悅副研究員，上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科；研究方向：自身免疫和自身炎癥性疾病的基礎和臨床研究。

賈錦超主治醫師，上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科；研究方向：自身免疫和自身炎癥性疾病的基礎和臨床研究。

馬宇寧醫師，上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科；研究方向：自身免疫和自身炎癥性疾病的基礎和臨床研究。

王孟燕醫師，上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科；研究方向：自身免疫和自身炎癥性疾病的基礎和臨床研究。

陳俠博士研究生，上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科；研究方向：自身免疫和自身炎癥性疾病的基礎和臨床研究。