本文轉載自微信公眾號：江農研之聲，作者江小儂

免疫熒光技術又稱熒光抗體技術，該技術主要通過抗原-抗體反應以檢測或定位各種抗原，可實現特異標志物的可視化。目前，隨著各類期刊要求的不斷提高，在免疫熒光實驗中，許多期刊都要求提供免疫熒光圖片的熒光強度定量圖。但在小伙伴們的日常數據處理中，常常只能一張一張地處理圖片，這對數據的處理效率大打折扣，接下面將詳細介紹免疫熒光圖片的批量處理方法，需要的小伙伴們快打開電腦一起學起來吧！

所需軟件：ImageJ

軟件下載網址：https://imagej.net/software/imagej

前期準備：將所有需要分析的免疫熒光圖片放到一個文件夾中，文件夾命名input；再另建一個空的文件夾，命名output。具體步驟如下：

打開ImageJ軟件——點擊File→Open——導入一張免疫熒光圖片

Step.2

點擊軟件工具欄中的Plugins→Macros→Record

此時會彈出Recorder頁面，此頁面是用于記錄后續圖片處理整個流程的代碼區，記得處理過程中不要關閉該頁面，這是后續實現批量處理的關鍵！！！

Step.3

點擊Image→Type→8-bit（圖片變成黑白色）→點擊Image→Adjust→Threshold

此時彈出Threshold頁面，且可以發現圖片中熒光部分被特異識別了出來，在該頁面中，可以手動調節閾值以改變其識別熒光區域；但為減小因人為調整閾值而引起的誤差，通常會點擊左下角的Auto，讓軟件自動識別熒光區域。

Step.4

點擊Analyze→Set Measurements

此時彈出Set Measurements頁面，大家可自行選擇需要測定的項目。通常，作者會選擇Area、Mean gray value、Integrated density、Display label和Limit to threshold，然后點擊ok即可。

Step.5

點擊Analyze→Measure

此時彈出Results頁面，可以發現，剛才在Set Measurements頁面所選中的測定項目都已得出相應的結果。此時，一張免疫圖片的分析工作就到此結束。

Step.6

復制recorder頁面代碼→點擊Process→Batch→Macro

此時會彈出Batch Process頁面，點擊input，選中input文件夾，點擊output，選中output文件夾；output format中可自行選擇輸出的文件格式，然后將Recorder頁面中的代碼復制到Batch Process頁面下方的空白區域中，點擊process即可。然后，會彈出Results頁面，input文件夾中所有熒光圖片均已得到相應結果。

Step.7

點擊Results頁面右上角File→Save as

可對測定結果進行保存，其中Mean即為所需的平均熒光強度。

轉自：江農研之聲，僅作學術分享使用；侵刪

2023年4月1日 | 第2035期

稿件來源 | 食品院研究生分會

作 者 | 張文凱

編 輯 | 翟鈺艷 蔣詩音 張嘯宇

責任編輯 | 丁晶

審 核 | 譚會樂 席步鑫

終 審 | 黃小珊

Tools

都在這里：

SCI母語潤色

專注生物醫學領域

唯 問 生 物

專注腫瘤基礎研究

19901610324同微信

About Us

吉諾生物--微信公眾號矩陣

吉諾健康

吉諾生物試劑

吉諾技術服務

吉諾生物--官方網站

吉諾生物試劑

吉諾技術服務