“Nucleolin–RNA interaction modulates rotavirus replication”于2024年2月發(fā)表在《Journal of Virology》期刊，該研究顯示輪狀病毒的復(fù)制受到核仁素的負(fù)調(diào)控，其調(diào)控方式是通過(guò)核仁素與病毒 RNA 上 G4 結(jié)構(gòu)的序列直接相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

病毒依賴細(xì)胞蛋白來(lái)完成其復(fù)制周期。就輪狀病毒而言，在其復(fù)制周期中細(xì)胞 RNA 結(jié)合蛋白所起的作用，是一個(gè)尚未得到充分研究的領(lǐng)域。在這項(xiàng)研究中，作者首次證實(shí)了核仁素與恒河猴輪狀病毒（RRV）的病毒 RNA 之間存在相互作用。核仁素是一種細(xì)胞蛋白，它在核糖體 rRNA 的代謝和核糖體生物發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮作用，而它似乎對(duì)恒河猴輪狀病毒（RRV）的病毒顆粒數(shù)量和病毒 RNA 拷貝數(shù)具有調(diào)控作用。作者的研究為當(dāng)前的輪狀病毒復(fù)制模型增添了一個(gè)新的要素，即細(xì)胞蛋白可以對(duì)輪狀病毒的復(fù)制起到負(fù)調(diào)控作用。輪狀病毒引發(fā)的腸胃炎給全球健康帶來(lái)了沉重負(fù)擔(dān)，尤其是對(duì) 5 歲以下的兒童影響很大。輪狀病毒是呼腸孤病毒科（Sedoreoviridae）的成員，屬于無(wú)包膜病毒，其特征是擁有一個(gè)三層的蛋白質(zhì)衣殼。它們的基因組由 11 個(gè)雙鏈 RNA（dsRNA）片段組成，這些片段編碼六種病毒結(jié)構(gòu)蛋白（VP1、VP2、VP3、VP4、VP6 和 VP7）以及六種非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5 和 NSP6）。在感染過(guò)程中，輪狀病毒采用復(fù)雜的策略，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞環(huán)境并劫持宿主蛋白來(lái)翻譯病毒蛋白和復(fù)制其基因組。

核仁素（Ncl）是一種真核生物的磷蛋白，主要存在于細(xì)胞核中，其中心區(qū)域具有一個(gè) RNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包含四個(gè) RNA 識(shí)別基序，能夠與 RNA 分子相互作用。這種蛋白在核糖體組裝、rDNA 轉(zhuǎn)錄以及前體 rRNA 的修飾和加工過(guò)程中發(fā)揮著多種作用。據(jù)報(bào)道，核仁素參與了幾種 RNA 病毒與細(xì)胞的結(jié)合和進(jìn)入過(guò)程，從而影響了這些病毒的初始感染過(guò)程此外，它還與杯狀病毒的病毒復(fù)制和翻譯以及登革熱病毒顆粒的組裝有關(guān)。

為了進(jìn)一步明確具有 RNA 結(jié)合能力的細(xì)胞蛋白在輪狀病毒復(fù)制過(guò)程中所起的作用，作者評(píng)估了核仁素（一種已知能與多種 RNA 病毒相互作用的 RNA 結(jié)合蛋白）在輪狀病毒復(fù)制周期中的作用。為此，作者評(píng)估了通過(guò) RNA 干擾（RNAi）技術(shù)沉默核仁素表達(dá)，對(duì)單個(gè)復(fù)制周期內(nèi)有感染性的輪狀病毒子代產(chǎn)量的影響。在這些實(shí)驗(yàn)中，將接種在 48 孔板中的 MA104 細(xì)胞用一組特異性靶向核仁素的 siRNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染 72 小時(shí)后，用四種不同的輪狀病毒毒株感染這些細(xì)胞，分別是恒河猴輪狀病毒（RRV）、猿猴輪狀病毒 SA11（SA11）、牛輪狀病毒（UK）和 人輪狀病毒毒株（Wa），感染復(fù)數(shù)（MOI）為 3。在感染后 15 小時(shí)（hpi），收獲被感染的細(xì)胞，并通過(guò)噬斑形成試驗(yàn)測(cè)定在這些條件下產(chǎn)生的病毒的病毒滴度（圖1A）。

作者發(fā)現(xiàn)，與轉(zhuǎn)染了非靶向?qū)φ眨∟T）siRNA 的細(xì)胞相比，從核仁素被沉默的細(xì)胞中獲得的四種輪狀病毒毒株的病毒滴度均有所增加。每種毒株的增加倍數(shù)分別為：恒河猴輪狀病毒（RRV）6.3 倍，猿猴輪狀病毒 SA11（SA11）4.8 倍，牛輪狀病毒（UK）3.3 倍，Wa 輪狀病毒毒株（Wa）2.4 倍（圖1A）。這一觀察結(jié)果表明，核仁素對(duì)這四種不同毒株的輪狀病毒感染均起到負(fù)調(diào)控作用。通過(guò)用抗核仁素抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡，并使用抗波形蛋白抗體（波形蛋白）對(duì)上樣對(duì)照進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后，通過(guò)光密度測(cè)定法評(píng)估得出，核仁素的敲低效率為 91%（圖1B）。在所研究的條件下，通過(guò)乳酸脫氫酶（LDH）釋放試驗(yàn)測(cè)定，用靶向核仁素的 siRNA 處理的細(xì)胞中未檢測(cè)到明顯的細(xì)胞活力變化（圖1C）。

圖1 核仁素表達(dá)的敲低促使RRV、SA11、UK 和 Wa 株輪狀病毒的滴度增加。（A）在 48 孔板中培養(yǎng)的 MA104 細(xì)胞，用非靶向（NT）siRNA 或核仁素 siRNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在轉(zhuǎn)染后 72 小時(shí)（hpt），細(xì)胞以感染復(fù)數(shù)（MOI）為 3 的 RRV、SA11、UK 和 Wa 型輪狀病毒進(jìn)行感染，并在感染后 15 小時(shí)收獲細(xì)胞。所示數(shù)據(jù)為三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的算術(shù)平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差。（B）用指定的 siRNA 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后 72 小時(shí)收獲，通過(guò)免疫印跡分析檢測(cè)蛋白質(zhì)，使用針對(duì)核仁素（Ncl）的抗體，并以波形蛋白（Vim）抗體作為上樣對(duì)照。使用 ImageJ 軟件對(duì)蛋白質(zhì)免疫印跡中 Ncl 和 Vim 條帶進(jìn)行光密度分析。（C）按照制造商的說(shuō)明，使用乳酸脫氫酶（LDH）釋放測(cè)定法評(píng)估細(xì)胞活力。顯示的是三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的算術(shù)平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差。

為了確定病毒復(fù)制周期中受核仁素敲低影響的階段，作者評(píng)估了病毒復(fù)制的初始階段。為此，用核仁素或非靶向（NT）小干擾RNA（siRNA）預(yù)先處理過(guò)的MA104細(xì)胞，以0.02的感染復(fù)數(shù)（MOI）感染恒河猴輪狀病毒（RRV）。將細(xì)胞固定，然后使用輪狀病毒顆粒的兔多克隆抗體（抗全病毒顆粒抗體，anti-TLPs），通過(guò)空斑形成試驗(yàn)對(duì)感染細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行定量。在核仁素沉默的細(xì)胞和NT對(duì)照細(xì)胞中測(cè)得的病毒滴度在兩組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異（圖2A），這表明核仁素的減少不會(huì)影響病毒進(jìn)入細(xì)胞。 為了評(píng)估核仁素對(duì)形成中間衣殼和外衣殼的病毒結(jié)構(gòu)蛋白合成的影響，作者通過(guò)對(duì)敲低核仁素的細(xì)胞裂解液中三種病毒結(jié)構(gòu)蛋白（VP4、VP6和VP7）的豐度進(jìn)行光密度測(cè)定分析，來(lái)分析病毒蛋白的含量。將MA104細(xì)胞轉(zhuǎn)染核仁素siRNA，然后在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)以感染復(fù)數(shù)為3的輪狀病毒RRV進(jìn)行感染。在感染后15小時(shí)收獲細(xì)胞，用抗TLP多克隆抗體通過(guò)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）免疫印跡法分析感染細(xì)胞的裂解液。在對(duì)照NT siRNA處理的細(xì)胞和核仁素沉默的細(xì)胞之間沒(méi)有觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異（圖2B和C）。這些結(jié)果證實(shí)，在核仁素表達(dá)降低的情況下，輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)量不受影響。

圖2 核仁素低表達(dá)對(duì)輪狀病毒感染性或病毒蛋白合成沒(méi)有影響。（A）如前所述，在96孔板中培養(yǎng)的MA104細(xì)胞用非靶向（NT）或核仁素（Ncl）siRNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染。隨后，細(xì)胞以感染復(fù)數(shù)（MOI）為0.02的恒河猴輪狀病毒（RRV）進(jìn)行感染，并按照“材料與方法”部分所述，在感染后15小時(shí)通過(guò)病灶形成試驗(yàn)測(cè)定病毒滴度。將轉(zhuǎn)染了非靶向siRNA的感染細(xì)胞數(shù)量視為100%的感染性。（B）MA104細(xì)胞用非靶向或核仁素siRNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染，然后以感染復(fù)數(shù)（MOI）為3的RRV進(jìn)行感染。在感染后15小時(shí)，收獲細(xì)胞，并通過(guò)免疫印跡分析檢測(cè)蛋白質(zhì)。該分析使用了一種能識(shí)別輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白（TLPs）的多克隆抗體、一種用于驗(yàn)證干擾效果的抗核仁素（Ncl）抗體，以及一種波形蛋白（Vim）抗體作為上樣對(duì)照。（C）使用ImageJ軟件對(duì)從（B）中所示的蛋白質(zhì)免疫印跡獲得的三種輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白（VP4、VP6和VP7）和波形蛋白（Vim）進(jìn)行光密度分析。給出的是三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的算術(shù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

在輪狀病毒感染期間，負(fù)義RNA的合成是衡量基因組復(fù)制的一個(gè)指標(biāo)，因?yàn)檫@是合成感染性子代病毒中的基因組雙鏈RNA的一個(gè)必要步驟。為了量化先前用核仁素siRNA處理過(guò)的、被恒河猴輪狀病毒（RRV）感染的細(xì)胞中基因組RNA的合成情況，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）擴(kuò)增輪狀病毒S10基因負(fù)鏈的特定豐度作為一個(gè)指標(biāo)。為此，以感染復(fù)數(shù)（MOI）為3的RRV對(duì)核仁素被敲低的MA104細(xì)胞進(jìn)行感染，并從在感染后0小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)和12小時(shí)收集的樣本中提取總RNA。數(shù)據(jù)以倍數(shù)增加的形式表示，并且如先前報(bào)道所述，將用非靶向（NT）siRNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在感染后12小時(shí)產(chǎn)生的RNA量作為倍數(shù)變化的一個(gè)單位。 為了定量S10基因負(fù)鏈和正鏈的數(shù)量，作者使用了一條用于定量PCR分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線，該標(biāo)準(zhǔn)曲線基于一個(gè)含有RRV S10基因片段互補(bǔ)DNA（cDNA）的質(zhì)粒構(gòu)建體（見(jiàn)材料與方法）。在核仁素表達(dá)被沉默的條件下，病毒負(fù)鏈的合成從感染后4小時(shí)開(kāi)始增加，一直持續(xù)到感染后12小時(shí)，與用非靶向siRNA處理的對(duì)照細(xì)胞中觀察到的RNA合成相比，顯著增加了5.8倍（圖3A）。 作者還測(cè)定了S10基因正鏈的豐度，它代表了雙鏈RNA基因組合成以及從轉(zhuǎn)錄過(guò)程中合成的信使RNA（mRNA）的總和。與作者在S10基因負(fù)鏈中觀察到的情況類似，與對(duì)照沉默細(xì)胞相比，在感染后8小時(shí)觀察到S10 RNA正鏈豐度增加，在感染后12小時(shí)顯著增強(qiáng)了3.5倍（圖3B）。這些發(fā)現(xiàn)支持了這樣一種觀點(diǎn)，即在核仁素表達(dá)被沉默的條件下，病毒RNA合成增加，這促成了所觀察到的子代病毒產(chǎn)生量的增加。

圖3 在核仁素沉默的細(xì)胞中，病毒RNA負(fù)鏈和正鏈的合成得到增強(qiáng)（A）S10基因負(fù)鏈水平和（B）S10基因正鏈水平。給出的是三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的算術(shù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

為了證明核仁素與輪狀病毒RNA之間存在潛在的相互作用，作者進(jìn)行了免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)。在該實(shí)驗(yàn)中，使用了一種針對(duì)核仁素的單克隆抗體對(duì)受感染或模擬感染（未感染病毒）的細(xì)胞裂解物進(jìn)行免疫沉淀。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）擴(kuò)增輪狀病毒的1、4和10號(hào)RNA片段，來(lái)檢測(cè)免疫沉淀復(fù)合物中輪狀病毒RNA的存在情況。作為陽(yáng)性對(duì)照，使用了針對(duì)病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP3的抗體進(jìn)行免疫沉淀，因?yàn)橐阎@種蛋白能特異性地結(jié)合所有輪狀病毒RNA片段。此外，作為陰性對(duì)照，使用了針對(duì)蛋白磷酸酶1（PP1）的抗體，此前已證明該抗體不與輪狀病毒RNA相互作用。 通過(guò)使用針對(duì)核仁素、NSP3和PP1的特異性抗體對(duì)沉淀物進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡（western blot）分析，驗(yàn)證了免疫沉淀實(shí)驗(yàn)的有效性（圖4A）。當(dāng)使用核仁素單克隆抗體對(duì)細(xì)胞裂解物中可能存在的蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物進(jìn)行免疫沉淀時(shí)，從受感染細(xì)胞中獲得了一條751堿基對(duì)的RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，該產(chǎn)物對(duì)應(yīng)于輪狀病毒的S10片段（圖4C）。當(dāng)使用針對(duì)NSP3的多克隆抗體進(jìn)行免疫沉淀時(shí)，也檢測(cè)到了這條擴(kuò)增產(chǎn)物。重要的是，使用PP1抗體時(shí)未觀察到擴(kuò)增條帶。為了證實(shí)病毒感染期間輪狀病毒的其他片段也能與核仁素結(jié)合，進(jìn)行了額外的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。且使用了多對(duì)引物來(lái)擴(kuò)增恒河猴輪狀病毒（RRV）的三個(gè)不同片段，即1號(hào)片段（S1）、4號(hào)片段（S4）和10號(hào)片段（S10）。使用特異性抗體對(duì)沉淀物中核仁素、NSP3和PP1的存在情況進(jìn)行了驗(yàn)證（圖4B）。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR），作者證實(shí)了對(duì)應(yīng)于S1、S4和S10的三個(gè)不同輪狀病毒片段的存在（圖4D）。綜上所述，這些結(jié)果為核仁素與恒河猴輪狀病毒（RRV）mRNA的三個(gè)不同片段之間存在特異性相互作用提供了證據(jù)。

圖4 核仁素在輪狀病毒感染的細(xì)胞中與病毒RNA結(jié)合（A）添加或不添加抗體進(jìn)行免疫沉淀（IP）所檢測(cè)到的蛋白質(zhì)的可視化結(jié)果。（B）input中的蛋白質(zhì)以及用于RNA檢測(cè)的免疫沉淀樣品中所檢測(cè)到的蛋白質(zhì)的可視化結(jié)果。（C）用TRIzol提取每個(gè)免疫沉淀樣品中存在的RNA，并通過(guò)end-point RT-PCR擴(kuò)增恒河猴輪狀病毒（RRV）的第10片段。擴(kuò)增產(chǎn)物在1%的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行分離。以輪狀病毒的RNA作為模板作為反應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照（+C），以水作為反應(yīng)的陰性對(duì)照（-C）。（D）使用逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）鑒定與S1、S4和S10對(duì)應(yīng)的RNA，并描繪出相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的RNA拷貝數(shù)。所展示的數(shù)據(jù)為三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的算術(shù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

為了確定核仁素與輪狀病毒S10 RNA的結(jié)合是否是因?yàn)榕c已鑒定的G-四鏈體（G4）結(jié)構(gòu)域的相互作用所介導(dǎo)的，將MA104細(xì)胞轉(zhuǎn)染了陽(yáng)性對(duì)照物AGRO100，這是一種已知能形成G-四鏈體結(jié)構(gòu)并特異性結(jié)合核仁素RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的寡核苷酸。作為陰性對(duì)照，將細(xì)胞轉(zhuǎn)染了CRO26，這是一種與AGRO100序列相同的寡核苷酸，其中的鳥(niǎo)嘌呤被胞嘧啶所取代。如“材料與方法”部分詳細(xì)所述，在轉(zhuǎn)染前對(duì)這些序列進(jìn)行了體外折疊處理。在這些實(shí)驗(yàn)中，先前已轉(zhuǎn)染了上述任一寡核苷酸的MA104細(xì)胞以感染復(fù)數(shù)（MOI）為3的恒河猴輪狀病毒（RRV）進(jìn)行感染。在感染后15小時(shí)，收集被感染的細(xì)胞，并按照先前描述的方法測(cè)定子代病毒的產(chǎn)生情況。作者發(fā)現(xiàn)，與轉(zhuǎn)染了CRO26的對(duì)照細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染了AGRO100的細(xì)胞中病毒產(chǎn)量增加了1.5倍（圖5A）。這一發(fā)現(xiàn)表明，核仁素的RNA結(jié)合基序參與了對(duì)輪狀病毒感染性顆粒產(chǎn)生的調(diào)控。為了確定在輪狀病毒基因組中預(yù)測(cè)的G-四鏈體結(jié)構(gòu)是否能模擬AGRO100的作用，作者合成了在RNA S10中鑒定出的三個(gè)G4序列（G4-1、G4-2和G4-3）。對(duì)這些序列進(jìn)行體外折疊處理后，將它們分別轉(zhuǎn)染到MA104細(xì)胞中，以評(píng)估它們對(duì)病毒產(chǎn)量的影響。值得注意的是，與對(duì)照寡核苷酸（CRO26）相比，用寡核苷酸G4-1和G4-3處理的RRV感染細(xì)胞顯示出病毒產(chǎn)量顯著增加，分別增加了1.6倍和2.1倍。相比之下，與對(duì)照組相比，寡核苷酸G4-2對(duì)病毒產(chǎn)量沒(méi)有顯著影響（圖5B）。作為額外的對(duì)照，在體外折疊處理前轉(zhuǎn)染了寡核苷酸G4-3（未折疊的G4-3，UnG4-3）。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與陰性對(duì)照CRO26相比，病毒滴度沒(méi)有變化，這表明G4結(jié)構(gòu)的折疊對(duì)于影響病毒的復(fù)制是必要的（圖5C）。最后，為了排除所觀察到的感染性病毒產(chǎn)量增加可能是由于RRV的G-四鏈體區(qū)域與其他細(xì)胞蛋白的非特異性相互作用所導(dǎo)致的這種可能性，并確定病毒產(chǎn)量增加與RRV的G4序列和核仁素的結(jié)合之間的直接關(guān)聯(lián)，通過(guò)RNA干擾（RNAi）使MA104細(xì)胞中核仁素蛋白的表達(dá)沉默。在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，隨后將細(xì)胞用折疊后的G4-3寡核苷酸轉(zhuǎn)染48小時(shí)。在這段時(shí)間之后，用RRV感染細(xì)胞，并在37攝氏度下培養(yǎng)，于感染后15小時(shí) 。對(duì)感染性子代病毒的定量分析顯示，在核仁素沉默的細(xì)胞中測(cè)得的病毒滴度與另外轉(zhuǎn)染了RRV G4-3的細(xì)胞相比，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異（圖5D）。 這些結(jié)果表明，G-四鏈體結(jié)構(gòu)通過(guò)阻斷核仁素的RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，有利于輪狀病毒RNA的復(fù)制。此外，這些結(jié)果還表明，在RRV的S10中發(fā)現(xiàn)的特定G-四鏈體序列（G4-1和G4-3）可能是核仁素的結(jié)合位點(diǎn)，而這種相互作用可能是細(xì)胞的抗病毒反應(yīng)之一。

圖5 具有預(yù)測(cè) G4 結(jié)構(gòu)的寡核苷酸對(duì)輪狀病毒子代產(chǎn)生的影響。（A）CRO26 和 AGRO100。（B）存在于 RRV S10 中的三個(gè)不同的假定 G4 區(qū)域的序列：G4-1（116–132 核苷酸（nt））、G4-2（572–607 核苷酸）和 G4-3（717–737 核苷酸）。（C）CRO26、未折疊的 G4-3 序列（UnG4-3）和折疊后的 G4-3。（D）在 48 孔板中培養(yǎng)的 MA104 細(xì)胞用核仁素 siRNA 使其基因沉默。在沉默 24 小時(shí)后，用輪狀病毒 G4-3 寡核苷酸（Ncl+G4-3）轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)后，細(xì)胞以感染復(fù)數(shù)（MOI）為 3 的 RRV 進(jìn)行感染。在感染后 15 小時(shí)，裂解細(xì)胞，并通過(guò)病灶形成試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞裂解物中的病毒滴度。所展示的數(shù)據(jù)為三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的算術(shù)平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差。

這項(xiàng)研究強(qiáng)調(diào)了核仁素在輪狀病毒感染過(guò)程中的重要性，它通過(guò)負(fù)向調(diào)節(jié)病毒RNA的合成以及感染性病毒的產(chǎn)生來(lái)發(fā)揮作用。當(dāng)在 MA104 細(xì)胞中敲低核仁素的表達(dá)時(shí)，病毒 RNA（vRNA）的拷貝數(shù)和病毒子代的數(shù)量都會(huì)增加。免疫沉淀實(shí)驗(yàn)表明，核仁素有可能通過(guò)與輪狀病毒 RNA 上的 G -四鏈體 RNA 結(jié)構(gòu)結(jié)合來(lái)與之相互作用。此外，作者使用了預(yù)測(cè)能夠形成 G -四鏈體結(jié)構(gòu)、并且模擬輪狀病毒基因片段 10 中序列的合成序列，證實(shí)了這些區(qū)域會(huì)阻礙核仁素的結(jié)合，從而導(dǎo)致有感染性的病毒顆粒的產(chǎn)生增加。這篇研究對(duì)探索具有RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)在RNA病毒感染中具有重要意義。

原文鏈接：https://journals.asm.org/doi/10.1128/jvi.01677-23?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori:rid:crossref.org&rfr_dat=cr_pub++0pubmed

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