做了一個月流式，陽性細胞群少得可憐，結果沒法用，抗體用空了好幾支，導師怒斥：干啥啥不行，花經費第一名，實驗停一段時間，禁不起你折騰。

師妹

我想要的那個表型根本分離不出來，是不是抗體不行？

師兄

還有其他可能，比如目標抗原的表達量本身是否就很低？有沒有分析過成功的文獻案例？

師妹

文獻里用兔單抗做出來了，咱們實驗室只有鼠抗，難道是因為種屬？

師兄

鼠單抗在某些情況下，特別是在檢測表達量低、豐度低、免疫原性較弱的指標時，可能因為親和力不足而導致檢測信號弱、分群不清，我上次也遇到類似問題！

師兄

后來換了 ABclonal ABflo? 的兔單抗做出結果了，還剩一點你拿去。ABclonal 最近還推出 400 多款流式抗體試用活動（點此申領試用裝），解決你的燃眉之急！

師妹

鼠單抗還有不行的時候，我這就去試試兔的！

做流式實驗還在用傳統鼠單抗碰運氣？很多結果不理想可能就是因為抗體沒選對！ABclonal ABflo? 重組兔單抗憑高親和力、低交叉反應等優勢，成為復雜樣本檢測利器。ABclonal 現推出限時福利，400+流式抗體熱門靶點全覆蓋，識別下方二維碼可免費領（每個課題組最多申請 5 支不同貨號抗體，規格：10 T/2.5 μg）！

那么何時該換兔單抗？如何優化操作出「頂刊數據」？本文還為你提供了一份保姆級流式抗體攻略，快來看看吧！

抗體類型精準挑選

鼠單抗和兔單抗作為兩大主力「選手」，該如何根據實驗需求精準挑選？請參考以下抗體選擇指南：

Tips：務必選用經流式細胞術驗證的抗體，部分僅適用于 Western Blot 或免疫組化的抗體可能因表位構象差異，導致在流式實驗中標記效率低下。

預實驗優化標記條件

濃度梯度滴定：對抗體進行梯度稀釋后進行染色，摸索最佳抗體使用量。需注意，抗體用量過多不僅會增加實驗成本，還可能會因為 Fc 受體的非特異性結合導致分群變差，影響實驗結果。

同型對照設置：選擇與實驗抗體同亞型、同熒光素的同型對照抗體，用于區分非特異性結合信號。尤其在檢測弱陽性細胞群時，同型對照可幫助避免假陽性結果。

補償調節驗證：多色實驗前，需使用單染樣本進行熒光補償調節，校正不同熒光通道間的光譜重疊。

規范操作減少實驗誤差

孵育條件控制：抗體通常 4℃ 避光孵育 20～30 分鐘，避免室溫下非特異性結合增加。對于胞內染色，選擇與后續熒光標記兼容的固定劑（如多聚甲醛）和破膜劑（如 Triton X-100），先進行固定破膜處理。

洗滌效率優化：采用離心洗滌結合合適的洗滌緩沖液（含 2% BSA 的 PBS 可減少非特異性吸附），確保未結合抗體充分去除。需注意避免過度洗滌導致細胞損失或抗原表位破壞。

多色標記順序：遵循「弱熒光→強熒光」的標記原則，優先標記低表達抗原的弱熒光抗體，后標記高表達抗原的強熒光抗體，降低熒光滲漏對結果的影響。

優先選擇直標抗體：熒光標記二抗可能帶入更多背景雜信號，需要做更多的實驗條件優化，實驗操作時間長。因此在條件允許的范圍內，建議盡量用直接標記的抗體進行實驗。

ABflo? 系列流式重組兔單抗堪稱「流式利器」！不僅能解決細胞分群不明顯的問題，還可應對背景高、批間差異大等常見流式難題，直擊傳統鼠抗的性能短板。接下來就帶你解鎖這款重組兔單抗的硬核實力！

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重組兔單抗：流式抗體的革新之選

為何以重組兔單抗為流式核心？兔源抗體相較鼠抗主要具備以下優勢：

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ABflo? 系列流式重組兔單抗的核心優勢

特異性高

ABflo? 流式重組兔單抗經多元化樣本（如陰性樣本、敲除樣本、過表達樣本；細胞系與原代細胞等）驗證，特異性高，結果可信。與市場主流品牌對標檢測，效果優秀。

ABflo? 流式抗體檢測陰性樣本無陽性群，而在陽性樣本上陰陽分群效果優于競品，抗體特異性高。

極佳信噪比

每一支 ABflo? 流式重組兔單抗都經過了內部嚴格的最佳用量摸索實驗，有著極佳的信噪比。

ABflo? 594 Rabbit anti-Human CD62L/L-Selectin mAb （A24632）

結果顯示，采用不同濃度的 ABflo? 594 標記的 CD62L 流式抗體，在 Human PBMC 樣本上進行滴定實驗，并分別計算出不同濃度下陰、陽性細胞群體的 MFI 值（平均熒光強度）及其 SNR 值（信噪比）。在 156.25～5 000 ng/mL 的范圍中，我們的抗體均可以對 PBMC 有效分群，有著優異穩定的信噪比。

批間一致性高

ABflo? 流式重組兔單抗采用體外重組表達技術生產，標準化流程解決了傳統雜交瘤技術的遺傳漂移問題，批間差異小，結果重復性好。

每批抗體生產后均會留樣，與以往批次進行同步驗證，CV% 在 10% 以內，保證批間一致性。

純度高

抗體性能與抗體純度密切相關，ABflo? 流式重組兔單抗純度經由 SDS-PAGE（還原樣本與非還原樣本）檢測和 SEC-HPLC 定量純度檢測，抗體單體純度可達 98%以上。

SEC-HPLC 定量純度檢測，抗體純度 > 98%

穩定性好

ABflo? 流式重組兔單抗基于熱動力學，進行加速破壞實驗驗證穩定性，37℃ 存放 28 天模擬 4℃ 保存 4 年，確保抗體性能長期穩定。

結果表明，經過穩定性測試的抗體在 37℃ 存放 7～28 天，細胞陰陽分群、MFI 和染色指數均無明顯差異，產品具有良好的穩定性。

靶點及熒光染料豐富，輕松搭配

ABclonal 目前有 1,000+ 流式抗體產品在售，涉及人、小鼠、大鼠、猴、犬、豬、貓等多個物種，17+ 種熒光素可選，輕松搭建多色流式實驗方案。

小鼠 PBMC_TNK 四色分型

人 PBMC_TBNK 七色分型

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ABclonal 如何研發生產出優質的 ABflo? 流式重組兔單抗？

ABclonal依托自主 SMab? 單 B 細胞抗體平臺開發流式抗體，通過單個 B 細胞體外培養與大規模重組表達實現批量生產，全流程嚴格把控抗體特異性、信噪比、批間一致性、純度及穩定性。

主要開發流程簡介：

抗原免疫

根據靶點背景及研發目標，采用多元化的抗原免疫策略，如真核活性蛋白、穩轉細胞株、LNP-mRNA、修飾性多肽、小分子抗原等，對兔子進行免疫，產生大量抗原特異性B細胞。

B 細胞分選和培養

將兔脾臟提取分離為單細胞后，通過流式分選，將表達目的抗體的 B 細胞分選為單個 B 細胞，然后進行單 B 細胞培養。

篩選與驗證

收集單 B 細胞培養后的上清，通過FACS、Elisa、WB 初篩陽性克隆，擴增后提取抗體基因構建表達載體，在 293T 細胞二次驗證，最終重組表達獲得目標抗體。

ABclonal 流式解決方案

不止于流式抗體

ABclonal 流式解決方案，不止于流式抗體。除了覆蓋免疫、腫瘤、干細胞等方向的高親和力、高特異性流式抗體，ABclonal 還自主推出ABCyte 流式細胞儀，滿足從樣本采集到結果分析的一體化檢測需求。

除了細胞水平的流式檢測，ABclonal 也布局微球流式，提供 ABplex 多指標流式聯合分析系統及配套多因子檢測試劑盒，實現多靶點同時檢測、提高數據通量與實驗效率。ABclonal 致力于構建覆蓋「優質流式試劑 × 精密儀器 × 專業服務」的流式平臺，為科研工作者提供更系統、高效的一站式技術支持。靠譜的流式抗體，盡在 ABclonal，識別下方二維碼，400+流式抗體免費試用！

內容策劃：王丹琦

內容審核：吳軍

題圖來源：圖蟲創意