隔壁組流式檢測 RNA 又發頂刊了，而我們還在流式實驗上苦苦掙扎，我們「差」在哪？（文末還有驚喜！）

菜雞大家庭

師姐

師弟，你怎么愁眉苦臉的？

別提了！導師說我的課題要做流式細胞術，我還是一頭霧水，一會兒做配色，一會要調補償！真不知道咋整？

師弟

師兄

流式確實有點難度，當年剛開始我也是摸不著北。不僅在流式配色上盡可能減少熒光染料之間的光譜重疊，避免補償。還要在樣本設計時做好對照，才能保證數據準確。

師姐

別說你了。其實我也有好多問題，文章被高分期刊退回，理由是不夠創新。現在已經做了一堆流式數據，我也不知道咋辦。

大家別慌，我去趴隔壁墻角聽聽他們是咋做流式的！

師弟

你有過實驗室里的這些困惑嗎？別灰心，我們特意在5 月 15 日 14 點帶您輕松上手流式實驗！賽默飛世爾科學技術專家聯合丁香園將帶來《流式檢測「升維」前沿應用與高維流式避坑指南》在線直播，從配色、補償到數據分析，全方位總結流式避坑技巧，細致講解多色流式技術。還有 PrimeFlow RNA 技術詳解及高分文獻分享，幫助大家順利實現多色共染和 RNA 共標。

現成功報名直播的前 400 名幸運者免費獲得賽默飛上百頁紙質版的《流式細胞分析實驗方案》，包含流式樣本制備、細胞刺激、補償調節及表型分析等 Protocol，干貨滿滿，趕快來領取！在直播當日，更有機會獲得天貓精靈、藍牙耳機、京東卡及外交官雙肩包等驚喜好禮～

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報名成功可得報名禮

在這里，輕松上手流式實驗

流式手冊干貨搶先看

從樣本制備到流式上機檢測，我們還會遇到很多的實驗細節和特殊樣本處理問題。結合多年實驗經驗，精心總結《流式細胞分析實驗方案》，你想知道的實驗細節在這里都能找到答案。比如大家經常遇到的胞內抗原染色方案：

1. 細胞內（胞質）蛋白染色：適用于檢測在體外或體內活化后的細胞，胞漿內蛋白、細胞因子或其他分泌蛋白。

1）細胞刺激：利用細胞刺激混合物（加蛋白質轉運抑制劑）刺激細胞 4 h，促進效應因子的產生。

2）收集細胞并制備成單細胞懸液；利用可固定細胞活性染料進行死活染色（可選）。

3）細胞表面抗原染色，4 ℃，避光 15～30 分鐘。

4）最后一次洗滌后，棄掉上清液，充分渦旋混勻樣本，通常保留 100 μL 左右體積。

5）加入 100 μL 流式胞內固定液以固定細胞，渦旋混勻，室溫，避光孵育 20～60 分鐘。

6）加入 2 mL 1X 流式破膜緩沖液， 室溫 400～600 x g 離心 5 分鐘，棄掉上清液。

7）加 100 μL 1X 流式破膜液重懸細胞，并加入流式胞內抗體，室溫，避光孵育 20～60 分鐘。

8）加入 2 mL 1X 破膜液，離心后棄掉上清液，以適當體積的流式細胞染色緩沖液重懸細胞。

2. 細胞內（核內）蛋白染色：適用于在單細胞水平上同時檢測細胞核內抗原、細胞胞漿抗原以及細胞表面抗原。

1）收集細胞并制備成單細胞懸液；利用可固定細胞活性染料進行死活染色（可選）。

2）細胞表面抗原染色，4 ℃，避光 15～30 分鐘。

3）最后一次洗滌后，棄掉上清液，充分渦旋混勻樣本，通常保留 100 μL 左右體積。

4）加入 1 mLFoxp3 固定/破膜工作液，渦旋混勻，在 2～8 °C 或室溫，避光孵育 30～60 分鐘。

5）加入 2 mL 1X 破膜緩沖液，室溫 400～600 x g 離心 5 分鐘，棄掉上清液 。

6）用 1X 破膜緩沖液重懸細胞 ，終體積調至約 100 μL，加入流式胞內抗體，室溫，避光孵育 30 分鐘以上。

7）加入 2 mL 1X 破膜緩沖液，離心后棄掉上清液，以適當體積的流式細胞染色緩沖液重懸細胞。

更多流式細胞實驗方案及技巧均會展示在手冊中，快來點此報名，前 400 名即可獲得上百頁流式實驗紙質版手冊～

心動福利雙響炮

報名禮：400 份流式實驗步驟干貨資料

前 400 名掃碼填寫問卷、最終報名成功的幸運者，即可獲得賽默飛上百頁《流式細胞分析實驗方案》。這本手冊中包含了全面的流式實驗步驟，幫助您更好地完成流式實驗，最終得到高質量流式結果。

直播當日獎品：5 月 15 日當天直播 99 份驚喜好禮

直播當天抽獎環節，99 位流式幸運官將有機會獲得天貓精靈藍牙音箱、藍牙耳機、超值京東卡、外交官雙肩包、筆記本電腦支架及賽默飛抗體系列冰盒等豐厚精美禮品。

注：以上所有獎品預計將于 5 月下旬陸續發出。

內容策劃：鄒禮平

內容審核：吳軍

題圖來源：賽默飛