細胞培養基的制備會對哺乳動物細胞的生長和實驗結果造成重大影響。同樣地,微生物的體外培養也高度依賴特定配方的培養基。培養基是細胞生長及化合物調控細胞形成的能量來源,可同時滿足原核和真核細胞培養對特定生長環境的要求。培養基的選擇主要取決于培養類型、培養目的和細胞密度的要求。
默克Sigma-Aldrich專門針對處理細胞培養應用的研究人員的需求,提供了廣泛的細胞培養支持用品,涵蓋了3D細胞增殖、細胞和組織培養、細胞保存和存儲、細胞可視化、細胞培養擴大化以及干細胞和組織工程等應用。
默克培養基
培養基制備
市售培養基分為脫水型、干粉型、濃縮液型或工作溶液型。脫水型肉湯培養基需要在蒸餾水中溶解并在滅菌前調節最終的pH值進行制備。用于瓊脂培養的干粉培養基必須首先溶解在蒸餾水中進行攪拌,然后煮沸或高壓滅菌,最后再使用無菌技術倒入無菌的培養皿中。濃縮液型培養基必須先在蒸餾水中進行無菌稀釋,并在調節pH值后分裝到無菌的容器中進行儲存。工作溶液型培養基在無菌過濾或無菌條件下加入所需的血清或其他補充劑并溫熱至細胞生長的合適溫度后再使用。
培養基滅菌
干粉型培養基在使用前必須經過濾、加熱或高壓進行滅菌。液體培養基通常是無菌且即用濃縮形式的,但也同樣建議進行無菌過濾,尤其是在使用前添加了血清或其他補充劑。培養基滅菌后應使用無菌技術進行處理以防止交叉污染或有害微生物的生長。
培養基補充劑
細胞培養或調節所需的某些補充劑穩定性或耐熱性差,因此必須在使用前將其添加到熱滅菌的基礎培養基中。胎牛血清(FBS)是動物細胞培養基中常用的一種補充劑。某些特定細胞類型的生長可能添加激素、生長因子和特定的信號分子,例如,使用IPTG等添加劑來誘導蛋白表達。還可在培養基中添加抗生素來控制細菌和真菌污染物的生長,但適當地處理和儲存培養基也能很好地控制污染。
培養基的儲存與使用
市售現成的液體型、瓊脂型或工作溶液型培養基通常需避光保存在4°C的環境中以抑制機會性微生物的生長并防止光誘導的培養基成分降解。因此在進行培養物接種前,宜將培養基溫熱至適宜細胞生長的溫度。
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