巨噬細胞活化綜合征 （MAS）是一種高炎癥反應 綜合征 ， 屬于繼發性 噬血細胞性淋巴組織細胞增生癥 （HLH）， 是 風濕性疾病 ， 尤其是 成人斯蒂爾病（AOSD） 的嚴重并發癥 ，顯著 危害了患者的生存 。 盡管 目前 部分MAS患者經 包括 大劑量糖皮質激素 及 環孢素 在內的 一線方案 可 達到 緩解，但仍有部分難治性患者對常規治療反應不佳 。 因此，深入解析MAS 發生 的分子機制，探索其關鍵信號通路，對 選擇治療方案 、改善患者 結局 具有重要價值。 團隊前期的 研究表明，中性粒細胞介導的炎癥風暴是AOSD的特征。因此，從中性粒細胞角度 切入 研究MAS的發生機制具有重要臨床意義。

近日，上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科胡瓊依團隊在Blood雜志上發表了題為RuxolitinibTargets JAK-STAT Signaling to Modulate Neutrophil Activation in Refractory Macrophage Activation Syndrome的研究論文，借助臨床樣本、體內外實驗、高通量測序等手段，揭示JAK-STAT通路在AOSD-MAS中的致病作用，并證實以此為靶點使用選擇性JAK1/2抑制劑蘆可替尼治療MAS的理論依據。

傳統上認為MAS是單核吞噬細胞系統異常增殖和活化的結果，盡管中性粒細胞在AOSD中扮演重要的致病 角色 ，但其在MAS中的 身份 仍然未知 。為此，團隊首先分析了AOSD-MAS患者的中性粒細胞和外周血單個核細胞（PBMC）的RNA-seq測序數據，發現中性粒細胞上調的差異基因顯著富集于先天免疫相關的通路。同時，在CpG誘導的MAS小鼠模型中使用中性粒細胞特異性抗體清除中性粒細胞能顯著降低炎癥因子水平， 其效果 和清除單核細胞的效果相當。另外， 通過 RNA-seq測序、流式 細胞術 及 Olink 數據 分析發現 MAS患者中性粒細胞JAK-STAT通路激活，相關炎癥因子 顯著 升高。

進一步分析 發現 JAK1/JAK2與中性粒細胞功能相關基因呈強相關， JAK1/2抑制劑蘆可替尼 已在HLH中證實其安全有效，然而在AOSD-MAS中 的使用經驗 僅 在 個別 病例 報道 中 描述 。對此，團隊對 本中心的 10例難治性AOSD-MAS患者使用蘆可替尼進行治療，發現8例實現完全緩解且 激素 劑量得以快速減量，1例達到部分緩解，另有1例在 激素 減量 過程中 出現復發。所有患者的臨床癥狀、 Pouchot 評分和 HScore 顯著下降在首月即得到改善。 O link 檢測 到 中性粒細胞活化相關 細胞因子 在治療后 亦明顯下降。這些結果提示蘆可替尼可抑制 MAS的過度 炎癥反應 ，并可能有調節中性粒細胞的作用 。

為進一步探索蘆可替尼對免疫細胞的影響，團隊收集了患者蘆可替尼治療前后的中性粒細胞和PBMC進行RNA-seq測序， KEGG 分析發現蘆可替尼 在轉錄組水平上 影響了中性粒細胞NETosis。 后續的原代細胞 體外實驗證實治療后中性粒細胞NETs形成 顯著 減少， 并且 血清NETosis標志物顯著下降。 利用NETosis缺陷 （ Padi4 -/- ） 小鼠進行體內實驗 進一步 證實NETosis 能 介導MAS炎癥風暴的發生。

繼續使用GSEA 分析治療前后的RNA-seq測序數據發現蘆可替尼影響了中性粒細胞 的 IL - 6 - STAT3通路以及PBMC 的 IL-6 - STAT3和IL-2 - STAT5通路 ，這些患者的血清中也被證實存在能激活白細胞STAT3和STAT5磷酸化的成分 。 繼而，在MAS模型中 選擇性抑制STAT3或STAT5可減輕全身炎癥反應 ，降低NETosis標志物 。

目前已知超過100個基因與HLH相關，其中11個致病基因的機制相對明確。然而，為何特定自身免疫性疾病患者會進展為MAS仍不清楚。 對這 10例使用蘆可替尼治療 的MAS患者進行WES測序發現 12個JAK-STAT通路相關基因 的VUS 變異 。功能學實驗證明其中 PDGFRB 、 PDGFRA 、 SOCS4 、 PIAS4 、 IL7R 、 IL27RA 、 IL12RB1 、 IL11RA 和 IL10RA 中10個基因的變異能影響STAT3/STAT5的磷酸化。

綜上所述 ， 這項研究揭示 中性粒細胞在MAS中的重要致病作用， 闡明 蘆可替尼 能 通過廣泛抑制JAK-STAT信號通路調控中性粒細胞活化 的機制 ， 為 臨床使用 蘆可替尼 治療 難治性AOSD-MAS患者 提供 新的 理論依據 ，并有望推動AOSD-MAS的基因靶向治療新策略 。

上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院風濕免疫科馬宇寧醫師、陳俠博士和王孟燕醫師為論文的共同第一作者，胡瓊依 副研究員 、賈錦超 主治醫師 、孫悅 副研究員 和滕佳臨 主任醫師 為論文的共同通訊作者。

原文鏈接:https://ashpublications.org/blood/article/doi/10.1182/blood.2024024362/537326/Ruxolitinib-Targets-JAK-STAT-Signaling-to-Modulate

制版人：十一

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