趙欣,馬巖松,楊丹,等. 人用狂犬病疫苗研發(fā)藥學(xué)研究思考 [J]. 中國(guó)新藥雜志, 2025, 34 (06): 650-655.

1 人用狂犬病疫苗國(guó)內(nèi)外上市產(chǎn)品情況

自1885年路易斯·巴斯德(Louis Pasteur)研發(fā)人用狂犬病疫苗以來(lái)，其使用已有上百年歷史，經(jīng)歷了動(dòng)物神經(jīng)組織培養(yǎng)疫苗、禽胚細(xì)胞培養(yǎng)疫苗、細(xì)胞培養(yǎng)疫苗等不同發(fā)展階段[1-3]。

《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版三部收載凍干人用狂犬病疫苗(Vero細(xì)胞)、凍干人用狂犬病疫苗(人二倍體細(xì)胞),人用狂犬病疫苗生產(chǎn)工藝主要采用狂犬病病毒的固定毒株接種于特定細(xì)胞，經(jīng)過(guò)細(xì)胞和病毒培養(yǎng)、收獲、濃縮、病毒滅活、純化等工藝制備而成[4]。

目前國(guó)內(nèi)外已上市的人用狂犬病疫苗均為采用細(xì)胞培養(yǎng)工藝生產(chǎn)的滅活疫苗，歐洲、美國(guó)上市的人用狂犬病疫苗為賽諾菲公司、葛蘭素史克公司等上市的滅活狂犬病疫苗，我國(guó)上市的人用狂犬病疫苗為國(guó)內(nèi)企業(yè)生產(chǎn)的滅活疫苗，其生產(chǎn)企業(yè)數(shù)量較多。國(guó)內(nèi)已上市產(chǎn)品生產(chǎn)所用毒種、細(xì)胞來(lái)源多樣，生產(chǎn)用毒株包括CTN株、aG株、PM株、PV株等；生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)包括原代細(xì)胞(地鼠腎細(xì)胞、雞胚細(xì)胞等)、連續(xù)傳代細(xì)胞(Vero細(xì)胞)、人二倍體細(xì)胞(MRC-5細(xì)胞)等。凍干人用狂犬病疫苗(Vero細(xì)胞)具有較多產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，多數(shù)上市產(chǎn)品采用Vero細(xì)胞生物反應(yīng)器灌流培養(yǎng)進(jìn)行生產(chǎn)，其他類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)工藝包括細(xì)胞工廠培養(yǎng)、生物反應(yīng)器(籃式、微載體)批次培養(yǎng)工藝等。不同細(xì)胞、毒種、生產(chǎn)工藝及生產(chǎn)規(guī)模等對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量控制帶來(lái)不同程度的挑戰(zhàn)，如何保證上市產(chǎn)品的安全、有效及質(zhì)量可控性是生產(chǎn)企業(yè)及監(jiān)管機(jī)構(gòu)需要關(guān)注的重點(diǎn)。

2 人用狂犬病疫苗研發(fā)質(zhì)量研究關(guān)注點(diǎn)2.1 藥學(xué)研發(fā)及申報(bào)資料的整體考慮

2020年6月，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《生物制品注冊(cè)分類(lèi)及申報(bào)資料要求的通告》(2020年第43號(hào))指出[5],自2020年10月1日起生物制品的注冊(cè)申報(bào)按照《M4:人用藥物注冊(cè)申請(qǐng)通用技術(shù)文檔(CTD)》格式及要求撰寫(xiě)申報(bào)資料，其中《M4Q(R1):人用藥物注冊(cè)通用技術(shù)文檔：藥學(xué)部分》有較為明確的研究?jī)?nèi)容目錄及對(duì)應(yīng)相關(guān)要求[6],研發(fā)企業(yè)應(yīng)按照相應(yīng)內(nèi)容規(guī)范撰寫(xiě)申報(bào)資料。研發(fā)企業(yè)應(yīng)切實(shí)有效保障申報(bào)資料的質(zhì)量，確保申報(bào)研究資料全面、真實(shí)、準(zhǔn)確，高質(zhì)量的申報(bào)資料是高效、快速技術(shù)審評(píng)的重要基礎(chǔ)及保障[7]。

在上述文件框架下，對(duì)于其中的細(xì)胞基質(zhì)、毒種批、病毒滅活驗(yàn)證、產(chǎn)品質(zhì)量特性等具體研究可參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)指南的要求，將具體的研究資料歸納于其對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)用原材料、工藝開(kāi)發(fā)及驗(yàn)證、質(zhì)量特性研究及結(jié)構(gòu)確證等部分。同時(shí)，建議采用藥物研發(fā)(ICH Q8)、質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理(ICH Q9)、藥品質(zhì)量體系(ICH Q10)等理念開(kāi)展傳統(tǒng)疫苗的研發(fā)，引導(dǎo)人用狂犬病疫苗在開(kāi)發(fā)中積累更多的產(chǎn)品知識(shí)和工藝知識(shí)，提升產(chǎn)品生產(chǎn)工藝全過(guò)程控制及整體質(zhì)量控制水平[8-10]。

2.2 生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)及毒種

生產(chǎn)用細(xì)胞庫(kù)及毒種庫(kù)的構(gòu)建和質(zhì)量檢定應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版三部人用疫苗總論及各論的相關(guān)要求[4],細(xì)胞及毒種的來(lái)源、傳代歷史、細(xì)胞庫(kù)/毒種庫(kù)構(gòu)建等應(yīng)清晰明確。關(guān)注細(xì)胞及毒種篩選、建庫(kù)的規(guī)范性，應(yīng)確保生產(chǎn)制備過(guò)程中沒(méi)有外源病毒因子引入的風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)對(duì)細(xì)胞庫(kù)、毒種庫(kù)、生產(chǎn)終末細(xì)胞、超高代次細(xì)胞等進(jìn)行全面自檢和復(fù)核檢定，以確保構(gòu)建的細(xì)胞庫(kù)、毒種庫(kù)符合生產(chǎn)要求及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.2.1 生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)

我國(guó)已上市人用狂犬病疫苗生產(chǎn)細(xì)胞包括原代細(xì)胞、人二倍體細(xì)胞和連續(xù)傳代細(xì)胞，采用不同細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)的人用狂犬病疫苗在外源因子風(fēng)險(xiǎn)、細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模、病毒產(chǎn)量、產(chǎn)品相關(guān)殘留雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)等質(zhì)量研究方面存在不同特點(diǎn)。目前采用Vero細(xì)胞進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品占批簽發(fā)及免疫接種中的大部分，原代地鼠腎細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)的疫苗逐漸被取代。近年來(lái)，隨著培養(yǎng)基、發(fā)酵設(shè)備、純化設(shè)備等改良和國(guó)產(chǎn)化發(fā)展，人二倍體細(xì)胞生產(chǎn)的人用狂犬病疫苗逐步實(shí)現(xiàn)商業(yè)化發(fā)酵罐培養(yǎng)，提升了收獲液病毒滴度水平，又在此基礎(chǔ)上新增了純化工藝，去除大量產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，達(dá)到了較高的產(chǎn)業(yè)化水平和質(zhì)量控制水平[11]。

生產(chǎn)細(xì)胞的細(xì)胞代次控制和傳代穩(wěn)定性研究是藥學(xué)研發(fā)及生產(chǎn)質(zhì)量控制的關(guān)注點(diǎn)之一。在細(xì)胞傳代穩(wěn)定性研究方面，疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞應(yīng)在與生產(chǎn)條件相同的培養(yǎng)條件下進(jìn)行連續(xù)傳代，確定細(xì)胞可使用的傳代水平。原則上，二倍體細(xì)胞應(yīng)至少傳代至衰老期，并計(jì)算其最高群體倍增水平，最高生產(chǎn)使用細(xì)胞代次應(yīng)限定于該細(xì)胞在該培養(yǎng)條件下細(xì)胞群體倍增水平的前2/3;傳代細(xì)胞用于疫苗生產(chǎn)的最高生產(chǎn)使用細(xì)胞代次應(yīng)限定于細(xì)胞未出現(xiàn)致瘤性的安全代次內(nèi)[4]。由于生物反應(yīng)器中細(xì)胞培養(yǎng)涉及多步細(xì)胞傳代擴(kuò)增，并需在罐內(nèi)進(jìn)行10～20 d的連續(xù)灌流培養(yǎng)，建議在細(xì)胞的傳代制備及發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代代次和倍增代次研究并予以限定，以更好地控制細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)及細(xì)胞相關(guān)雜質(zhì)殘留。

2.2.2 生產(chǎn)用毒株

我國(guó)已上市人用狂犬病疫苗生產(chǎn)用毒株包括CTN株、aG株、PM株、PV株等，均為狂犬病病毒固定株，存在自街毒株分離后的適應(yīng)過(guò)程?，F(xiàn)有生產(chǎn)用毒株包括自保藏機(jī)構(gòu)引進(jìn)毒株直接建立毒種庫(kù)或引進(jìn)毒株在不同細(xì)胞基質(zhì)中進(jìn)行毒株適應(yīng)培養(yǎng)馴化后建立毒種庫(kù)等情況，例如：生產(chǎn)毒株由原代地鼠腎細(xì)胞適應(yīng)為Vero細(xì)胞培養(yǎng)、由Vero細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)為雞胚細(xì)胞培養(yǎng)等。

毒株馴化傳代過(guò)程可能對(duì)疫苗生產(chǎn)用毒株的免疫原性、毒力、交叉保護(hù)、外源因子風(fēng)險(xiǎn)等方面產(chǎn)生影響，從而影響產(chǎn)品的生產(chǎn)控制及關(guān)鍵質(zhì)量屬性。例如：既往Flury株相關(guān)研究顯示，該毒株在傳代過(guò)程中存在關(guān)鍵糖蛋白(G蛋白等)氨基酸替換，其抗原性與親本相似，致病性與親本相似或更低[12]。對(duì)于毒株馴化培養(yǎng)過(guò)程，應(yīng)對(duì)毒株基因突變情況、致病力、病毒滴度、免疫原性、保護(hù)性等進(jìn)行變化趨勢(shì)等研究。根據(jù)毒株適應(yīng)過(guò)程中的變化程度，如有必要，需開(kāi)展馴化后街毒株保護(hù)性研究，以確保馴化后的毒株生產(chǎn)疫苗的安全有效性。此外，經(jīng)馴化后的毒株可能存在毒力下降的情況，不再適用《中華人民共和國(guó)藥典》腦腔攻擊病毒滴度的檢定方法，應(yīng)建立經(jīng)充分驗(yàn)證的替代方法，并在臨床研究中再次予以驗(yàn)證。

毒種傳代穩(wěn)定性研究應(yīng)能覆蓋實(shí)際生產(chǎn)的毒種傳代代次。由于生物反應(yīng)器中的病毒增殖較為復(fù)雜，病毒收獲液除質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中放行檢定項(xiàng)目外，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行基因測(cè)序，并與種子批基因測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比較，以證實(shí)生產(chǎn)過(guò)程中毒種的遺傳穩(wěn)定性。鼓勵(lì)采用高通量測(cè)序等方法進(jìn)行突變位點(diǎn)、突變頻率等定量評(píng)估，分析傳代過(guò)程中是否存在優(yōu)勢(shì)突變及其可能的趨勢(shì)。對(duì)于突變位點(diǎn)，應(yīng)進(jìn)行突變對(duì)產(chǎn)品安全性、有效性影響的綜合分析。

2.3 生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)及控制

ICH Q8提出設(shè)計(jì)空間、質(zhì)量源于設(shè)計(jì)(quality by design, QbD)的理念，應(yīng)對(duì)關(guān)鍵生產(chǎn)工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化研究，以支持關(guān)鍵生產(chǎn)工藝參數(shù)的確立，并建立良好的質(zhì)量控制體系[8]。人用狂犬病疫苗關(guān)鍵生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)質(zhì)量研究關(guān)注點(diǎn)舉例如下：關(guān)注細(xì)胞復(fù)蘇至病毒收獲液階段生產(chǎn)工藝設(shè)置的合理性，應(yīng)對(duì)不同培養(yǎng)及收獲階段的細(xì)胞增殖特性、病毒滴度、雜質(zhì)、關(guān)鍵產(chǎn)品質(zhì)量屬性等進(jìn)行質(zhì)量研究。由于培養(yǎng)及收獲工藝決定了病毒收獲液病毒滴度、抗原含量、DNA殘留、宿主細(xì)胞蛋白(host cell protein, HCP)殘留的起始值，因此也是影響原液質(zhì)量屬性的關(guān)鍵，應(yīng)考慮基于上述關(guān)鍵質(zhì)量屬性研究確定病毒培養(yǎng)工藝、收獲起止條件等，依據(jù)質(zhì)量研究數(shù)據(jù)制定病毒收獲液的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，確保中間產(chǎn)品的批間一致性及后續(xù)生產(chǎn)階段的質(zhì)量可控性。

人用狂犬病疫苗一般采用超濾后分子篩層析等工藝進(jìn)行純化，建議依據(jù)產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性控制及工藝研究數(shù)據(jù)等合理設(shè)置產(chǎn)品純化策略，依據(jù)質(zhì)量研究數(shù)據(jù)確定純化生產(chǎn)關(guān)鍵工藝參數(shù)。對(duì)于超濾濃縮工藝，應(yīng)對(duì)不同濃縮倍數(shù)條件下產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行質(zhì)量研究，依據(jù)研究及驗(yàn)證數(shù)據(jù)確定超濾濃縮倍數(shù)。對(duì)于柱層析工藝，應(yīng)明確純化柱體積、上樣體積、是否進(jìn)行層析柱串聯(lián)、純化液收集起始及終止范圍等關(guān)鍵工藝參數(shù)。

病毒滅活工藝應(yīng)能確保病毒完全滅活?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2020年版三部人用疫苗總論要求對(duì)影響滅活效果的相關(guān)因素進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)建立至少連續(xù)5批次樣品的病毒滅活動(dòng)力曲線進(jìn)行滅活效果的驗(yàn)證，通常以能完全滅活病毒的2倍時(shí)間確定滅活工藝的滅活時(shí)間[4]。應(yīng)依據(jù)工藝研究及驗(yàn)證數(shù)據(jù)對(duì)可能影響病毒滅活效果的因素進(jìn)行控制，如病毒液的蛋白含量、滅活劑濃度、溫度、時(shí)間等。在病毒滅活驗(yàn)證研究基礎(chǔ)上，應(yīng)對(duì)β-丙內(nèi)酯水解殘留、滅活前后抗原含量的變化等質(zhì)量屬性開(kāi)展研究。

若生產(chǎn)工藝中使用核酸內(nèi)切酶，應(yīng)對(duì)消化液濃度、消化時(shí)間等關(guān)鍵工藝參數(shù)進(jìn)行質(zhì)量研究，對(duì)可能由核酸內(nèi)切酶引入的外源因子風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，建議使用非動(dòng)物源性的核酸內(nèi)切酶，提供使用的核酸內(nèi)切酶制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、來(lái)源資質(zhì)證明等相應(yīng)證明性資料。應(yīng)對(duì)使用核酸內(nèi)切酶前后殘留DNA進(jìn)行對(duì)比研究，包括DNA殘留量、DNA片段大小等方面；對(duì)核酸內(nèi)切酶的去除效果進(jìn)行研究及相應(yīng)驗(yàn)證；在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加核酸內(nèi)切酶殘留的相應(yīng)檢項(xiàng)，確保核酸內(nèi)切酶的使用達(dá)到預(yù)期用途且不會(huì)對(duì)產(chǎn)品產(chǎn)生不良影響。

產(chǎn)品制劑處方組成及凍干工藝對(duì)產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性、產(chǎn)品穩(wěn)定性及有效期擬定等具有重大影響。產(chǎn)品開(kāi)發(fā)應(yīng)關(guān)注賦形劑、凍干保護(hù)劑的篩選，依據(jù)凍干生產(chǎn)設(shè)備及處方組成對(duì)凍干工藝進(jìn)行關(guān)鍵工藝和關(guān)鍵質(zhì)量屬性的開(kāi)發(fā)研究，研究確定的凍干關(guān)鍵工藝應(yīng)能保證較好的產(chǎn)品凍干效果。

2.4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量特性研究

人用狂犬病疫苗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已在國(guó)內(nèi)外藥典及世界衛(wèi)生組織(WHO)規(guī)程中予以明確，但對(duì)于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的關(guān)鍵檢測(cè)方法仍需重點(diǎn)關(guān)注，尤其是抗原含量檢測(cè)方法。由于各研發(fā)企業(yè)采用的生產(chǎn)毒株不同，抗原檢測(cè)使用的試劑盒多為研發(fā)企業(yè)自制試劑盒或外購(gòu)商業(yè)化試劑盒，應(yīng)關(guān)注檢驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)品的溯源、關(guān)鍵檢測(cè)試劑的來(lái)源及質(zhì)量等，對(duì)試劑盒及關(guān)鍵檢測(cè)試劑開(kāi)展充分的標(biāo)定、驗(yàn)證等質(zhì)量研究，以確保抗原含量檢測(cè)的批間一致性，從而保證產(chǎn)品生產(chǎn)中半成品配制的準(zhǔn)確性、產(chǎn)品生產(chǎn)的批間一致性。

除放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目外，建議對(duì)抗原結(jié)構(gòu)、純度及相關(guān)物質(zhì)歸屬、雜質(zhì)等方面拓展質(zhì)量特性表征研究，例如：電鏡、還原/非還原電泳、質(zhì)譜物質(zhì)歸屬分析等。建議開(kāi)展不同工藝階段抗原/總蛋白的比活研究，以證實(shí)雜質(zhì)的連續(xù)去除、產(chǎn)品純度的批間一致性等。鼓勵(lì)采用靈敏的、不同原理的方法對(duì)產(chǎn)品純度進(jìn)行質(zhì)量研究。

Vero細(xì)胞系連續(xù)傳代細(xì)胞，殘留宿主細(xì)胞DNA具有潛在風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)綜合考慮細(xì)胞來(lái)源、生產(chǎn)實(shí)際細(xì)胞傳代代次、細(xì)胞倍增代次、純化工藝對(duì)DNA去除能力、DNA殘留水平、DNA片段大小及其分布等方面，綜合評(píng)估殘留DNA的風(fēng)險(xiǎn)，盡可能將風(fēng)險(xiǎn)最小化。

無(wú)論何種細(xì)胞基質(zhì)，鼓勵(lì)建立HCP檢測(cè)方法用于工藝清除能力的表征及產(chǎn)品HCP殘留內(nèi)控，確保上市產(chǎn)品的HCP水平與臨床樣品殘留可比。對(duì)于二倍體細(xì)胞、原代細(xì)胞等細(xì)胞基質(zhì)，應(yīng)在產(chǎn)品開(kāi)發(fā)過(guò)程中進(jìn)行HCP檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)。

制劑生產(chǎn)工藝中，應(yīng)采用抗原含量進(jìn)行半成品的定點(diǎn)配制。上市商業(yè)化生產(chǎn)工藝的半成品配制點(diǎn)應(yīng)溯源至關(guān)鍵臨床試驗(yàn)研究批次，配制點(diǎn)的擬定應(yīng)滿足成品檢定放行及產(chǎn)品有效期內(nèi)效價(jià)合格等方面的要求。 成品生物學(xué)活性目前均采用《中華人民共和國(guó)藥典》各論中收錄的NIH法[4],建議開(kāi)展抗原含量-NIH效價(jià)的相關(guān)性研究。此外，無(wú)論是臨床期間變更還是上市后變更，變更前后確保同樣抗原劑量對(duì)應(yīng)生物活性的可比性是產(chǎn)品質(zhì)量可比性研究的關(guān)鍵，應(yīng)予以關(guān)注。

2.5 參考品

應(yīng)明確產(chǎn)品研發(fā)參考品的相關(guān)信息，提供參考品來(lái)源、制備、保存條件、標(biāo)定等研究資料。在關(guān)鍵質(zhì)量檢定方法(如抗原含量檢測(cè)等)中，自制參考品應(yīng)選擇與商業(yè)化產(chǎn)品具有代表性的樣品進(jìn)行制備，制備樣品應(yīng)可溯源至關(guān)鍵臨床試驗(yàn)研究批次或上一代參考品。參考品或其制備樣品應(yīng)進(jìn)行全面的質(zhì)量確證研究，并關(guān)注其穩(wěn)定性以確保賦值檢測(cè)的一致性。如參考品進(jìn)行變更，應(yīng)參考《已上市疫苗藥學(xué)變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則》等對(duì)不同批次參考品進(jìn)行標(biāo)定賦值及可比性研究，分析參考品變更后對(duì)檢測(cè)的影響，充分保證變更前后檢測(cè)結(jié)果的一致性。

WHO制備的第7批WHO狂犬病疫苗國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品(編號(hào)：NIBSC16/204)可用作成品效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品、抗原含量標(biāo)準(zhǔn)品，該參考品系采用Pitman Moore株在Vero細(xì)胞中培養(yǎng)制備而成，采用國(guó)際單位(international unit, IU)進(jìn)行校準(zhǔn)，NIH小鼠效價(jià)賦值為8.9 IU·安瓿瓶-1,ELISA法狂犬病糖蛋白抗原賦值為2.45 IU·安瓿瓶-1,進(jìn)行了13個(gè)月的穩(wěn)定性考察，在4 ℃和20 ℃保存的安瓿瓶中抗原含量沒(méi)有進(jìn)一步下降[13],其對(duì)于CTN株等其他毒株生產(chǎn)疫苗中抗原含量檢測(cè)的適用性需要進(jìn)一步研究。我國(guó)目前所用狂犬病疫苗國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品為第9批，由中國(guó)食品藥品檢定研究院制備，僅適用于成品效價(jià)標(biāo)定[14]。

企業(yè)在采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和/或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，應(yīng)關(guān)注標(biāo)準(zhǔn)品的適用性。如果將目前成品效價(jià)檢定使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品直接用于抗原含量賦值，且根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品換代進(jìn)行企業(yè)參考品換代時(shí)未開(kāi)展抗原含量的標(biāo)定及可比性研究，將對(duì)產(chǎn)品生產(chǎn)批間一致性及上市產(chǎn)品與關(guān)鍵人體臨床試驗(yàn)研究批次樣品的可溯源性等方面造成較大影響。因此建議采用關(guān)鍵人體臨床試驗(yàn)研究批次產(chǎn)品建立企業(yè)內(nèi)部檢測(cè)用標(biāo)準(zhǔn)品，并采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品和/或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)定，以確保上市產(chǎn)品與關(guān)鍵人體臨床研究批次的可溯源性，并確保上市產(chǎn)品的批間一致性。

2.6 生物制品批簽發(fā)數(shù)據(jù)分析

我國(guó)上市疫苗產(chǎn)品實(shí)行批簽發(fā)制度[15],在產(chǎn)品研發(fā)階段研發(fā)企業(yè)應(yīng)關(guān)注產(chǎn)品自檢與中國(guó)食品藥品檢定研究院的檢定結(jié)果是否一致，如存在差異應(yīng)與批簽發(fā)機(jī)構(gòu)進(jìn)行溝通并進(jìn)行原因研究及分析。

3 疫苗上市后變更

2024年6月，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心發(fā)布《已上市疫苗藥學(xué)變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》的通告(2024年第29號(hào))[16],明確上市許可持有人是疫苗上市后變更管理的主體，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)疫苗質(zhì)量體系的建設(shè)，持續(xù)優(yōu)化生產(chǎn)工藝，保持生產(chǎn)和控制的先進(jìn)性。將變更分為3類(lèi)：重大變更、中等變更、微小變更。變更可能影響疫苗安全性、有效性和質(zhì)量可控性的，應(yīng)當(dāng)經(jīng)國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn)。變更存在于產(chǎn)品全生命周期，無(wú)論何種變更類(lèi)型，均應(yīng)對(duì)變更進(jìn)行充分的可比性研究和必要的驗(yàn)證，確保變更后藥品質(zhì)量及生產(chǎn)批間一致性等方面不低于變更前水平，以避免由于既往變更未予充分研究，導(dǎo)致后續(xù)變更無(wú)法順利實(shí)施或開(kāi)展額外的臨床研究等問(wèn)題。

常見(jiàn)上市后變更包括場(chǎng)地轉(zhuǎn)移、生產(chǎn)規(guī)模放大、生產(chǎn)工藝變更、新增/變更原輔料供應(yīng)商、參考品變更等。生產(chǎn)工藝優(yōu)化等存在關(guān)聯(lián)變更情況，應(yīng)對(duì)每一項(xiàng)變更事項(xiàng)及關(guān)聯(lián)后變更對(duì)產(chǎn)品的整體質(zhì)量影響進(jìn)行充分的可比性研究，并關(guān)注可能的累積風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)特定質(zhì)量屬性與安全性和有效性之間的關(guān)系尚未確定，且觀察到變更前后產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性存在差異，應(yīng)進(jìn)行非臨床和/或臨床橋接研究[11,17]。近年來(lái)，由于《中華人民共和國(guó)藥典》各論等不斷更新，部分企業(yè)在按照《中華人民共和國(guó)藥典》要求進(jìn)行部分質(zhì)控項(xiàng)目變更時(shí)，存在直接套用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的問(wèn)題。對(duì)于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)變更，不應(yīng)僅以滿足《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)為唯一考量，應(yīng)確保變更后產(chǎn)品質(zhì)控水平與變更前等效或更優(yōu)。此外，需要考慮變更后國(guó)家檢定機(jī)構(gòu)復(fù)核檢驗(yàn)，如果有前期參與《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)定的相關(guān)研究數(shù)據(jù)，可考慮將其用于支持變更研究及復(fù)核檢驗(yàn)。疫苗上市后變更復(fù)雜多樣，鼓勵(lì)申請(qǐng)人通過(guò)溝通交流途徑，就復(fù)雜變更相關(guān)情況與相應(yīng)藥品監(jiān)管部門(mén)及技術(shù)單位進(jìn)行溝通。

4 新型人用狂犬病疫苗研發(fā)

滅活人用狂犬病疫苗已上市多年，在藥學(xué)質(zhì)量研究、臨床評(píng)價(jià)等方面積累了很多經(jīng)驗(yàn)，并在人體上驗(yàn)證了產(chǎn)品的安全性、有效性。

近年來(lái)，技術(shù)的發(fā)展為新型人用狂犬病疫苗的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。狂犬病病死率極高，現(xiàn)有已上市人用滅活疫苗基本滿足臨床需求，對(duì)于新型人用狂犬病疫苗研發(fā)立項(xiàng)依據(jù)仍須充分考慮是否真正滿足臨床需求，并通過(guò)充分的數(shù)據(jù)鏈予以驗(yàn)證新型技術(shù)路線的更多獲益和可接受的潛在風(fēng)險(xiǎn)。理論上，未被滿足的臨床需求包括更快的免疫起效、更長(zhǎng)的免疫持久性、減少免疫針次等?？袢楦咧滤佬约膊。_(kāi)發(fā)此類(lèi)疫苗需要關(guān)注的潛在高風(fēng)險(xiǎn)包括：研發(fā)產(chǎn)品是否能有效保護(hù)受試者、臨床保護(hù)力研究是否符合醫(yī)學(xué)倫理的要求、給藥劑量探索、mRNA疫苗等新型疫苗已在人體中出現(xiàn)的不良反應(yīng)以及人用狂犬病疫苗需多次注射(如每次犬傷均需全程免疫)而帶來(lái)的安全性評(píng)價(jià)等。

此外，由于新型疫苗開(kāi)發(fā)的作用機(jī)制可能不完全等同于滅活疫苗，其免疫起效時(shí)間、對(duì)不同街毒的交叉保護(hù)、給藥劑量等往往需要開(kāi)展犬類(lèi)街毒攻毒及量效關(guān)系臨床前保護(hù)力研究等，并進(jìn)行適宜的臨床研究驗(yàn)證。人用狂犬病疫苗研發(fā)進(jìn)展及藥學(xué)研究關(guān)注點(diǎn)介紹如下。

4.1 含佐劑的人用狂犬病疫苗

近年來(lái)，疫苗新佐劑的研發(fā)及佐劑作用機(jī)制等研究越來(lái)越深入[18-21]。已有企業(yè)在已上市滅活疫苗基礎(chǔ)上研發(fā)含佐劑的人用狂犬病疫苗，佐劑的添加對(duì)藥學(xué)研究、非臨床研究、臨床研究均提出了新的要求，應(yīng)充分考慮佐劑起效、效應(yīng)持久性和安全性等問(wèn)題，關(guān)注佐劑添加的合理性、安全性、有效性，提供相應(yīng)研究數(shù)據(jù)以支持產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。此類(lèi)疫苗的藥學(xué)研發(fā)在佐劑的來(lái)源及生產(chǎn)工藝、佐劑質(zhì)量研究、佐劑與抗原相互作用質(zhì)量研究、關(guān)鍵質(zhì)量屬性確認(rèn)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬定等方面是藥學(xué)研究重難點(diǎn)。在制劑處方開(kāi)發(fā)研究過(guò)程中需證實(shí)佐劑添加對(duì)臨床獲益的提示，研究數(shù)據(jù)應(yīng)支持佐劑與抗原有較好的相容性且成品處于穩(wěn)定狀態(tài)。

4.2 人用狂犬病mRNA疫苗

近年來(lái)，mRNA疫苗生產(chǎn)制備技術(shù)不斷發(fā)展，也被用于人用狂犬病疫苗的開(kāi)發(fā)[22-25]。藥學(xué)研究除應(yīng)滿足國(guó)內(nèi)外mRNA疫苗指南研究要求外，抗原序列選擇、目標(biāo)劑量選擇、免疫程序設(shè)定、免疫原性與保護(hù)效力的關(guān)聯(lián)性、關(guān)鍵質(zhì)量屬性確認(rèn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬定等方面也是產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和質(zhì)量研究的重難點(diǎn)。

對(duì)于藥學(xué)開(kāi)發(fā)，人用狂犬病mRNA疫苗原液/成品生物學(xué)活性、效力檢測(cè)方法、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其標(biāo)準(zhǔn)品的開(kāi)發(fā)和建立是產(chǎn)品研發(fā)及質(zhì)量研究關(guān)注的重點(diǎn)。建議通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)免疫原性研究、攻毒保護(hù)力研究等開(kāi)展mRNA疫苗與滅活疫苗劑量對(duì)應(yīng)關(guān)系的研究，建議在研究過(guò)程中使用國(guó)家和/或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行效價(jià)等標(biāo)定。針對(duì)NIH效價(jià)檢測(cè)，研發(fā)產(chǎn)品不宜直接采用《中華人民共和國(guó)藥典》滅活疫苗各論中NIH法的腹腔免疫給藥途徑及程序，建議開(kāi)展腹腔免疫、肌肉免疫后攻毒試驗(yàn)的保護(hù)效果研究，以確定該技術(shù)路線適宜的免疫途徑，并建議在上述研究基礎(chǔ)上，探索研究更適宜的效價(jià)檢測(cè)方法，制定合理的效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)限度。

4.3 重組人用狂犬病疫苗

重組人用狂犬病疫苗產(chǎn)品研發(fā)處于早期，此類(lèi)產(chǎn)品的研發(fā)面臨研發(fā)理論基礎(chǔ)薄弱等較多挑戰(zhàn)，其重組抗原的選擇及優(yōu)化研究較為重要，除理論分析外，尚需大量的非臨床研究結(jié)果對(duì)產(chǎn)品抗原選擇及制劑處方選擇的合理性進(jìn)行驗(yàn)證。

重組人用狂犬病疫苗藥學(xué)開(kāi)發(fā)整體上可參考基因工程重組蛋白的相關(guān)指南、佐劑疫苗的相關(guān)指南等。鼓勵(lì)借鑒較為成熟的技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行生產(chǎn)用細(xì)胞構(gòu)建及篩選、工藝開(kāi)發(fā)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立等系統(tǒng)研發(fā)。對(duì)于體內(nèi)效價(jià)等特異性的質(zhì)量研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)立，可參考上述人用狂犬病mRNA疫苗中的關(guān)注點(diǎn)。此外，建議建立能夠表征中和活性的抗體用于抗原含量的質(zhì)量控制。

5 結(jié)語(yǔ)

人用狂犬病疫苗在我國(guó)上市多年，目前我國(guó)已上市的人用狂犬病疫苗已基本滿足我國(guó)疾病防控需求，同時(shí)基于已上市產(chǎn)品批簽發(fā)等數(shù)據(jù)，顯示了我國(guó)人用狂犬病疫苗質(zhì)量基本穩(wěn)定且逐步提升。人用狂犬病疫苗仍面臨已上市產(chǎn)品持續(xù)開(kāi)發(fā)和變更、新企業(yè)申報(bào)、新型技術(shù)路線研發(fā)等問(wèn)題，本文基于人用狂犬病疫苗藥學(xué)研發(fā)關(guān)注點(diǎn)、上市后變更及有關(guān)新型人用狂犬病疫苗研發(fā)的討論，以期通過(guò)研發(fā)、生產(chǎn)企業(yè)與監(jiān)管機(jī)構(gòu)強(qiáng)化質(zhì)量研究技術(shù)和共性問(wèn)題的交流，保證生產(chǎn)產(chǎn)品的安全有效和質(zhì)量可控性，為疫苗研發(fā)、生產(chǎn)、產(chǎn)品質(zhì)量和工藝提升提供借鑒。

參考文獻(xiàn)

·[1] 王軍志.疫苗的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:451-471.

·[2] LIU C,CAHILL JD.Epidemiology of rabies and current US vaccine guidelines[J].R I Med J (2013),2020,103(6):51-53.

·[3] 俞永新.狂犬病和狂犬病疫苗[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2001:189-210.

·[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].2020年版.三部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020:35-40,151-155.

·[5] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于發(fā)布生物制品注冊(cè)分類(lèi)及申報(bào)資料要求的通告(2020年第43號(hào))[EB/OL].(2020-06-30).https://www.nmpa.gov.cn/yaopin/ypggtg/ypqtgg/202006 30175301552.html.

·[6] ICH.ICH M4Q(R1):the Common Technical Document for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use:Quality[EB/OL].(2002-09-12).https://database.Ich.org/sites/default/files/M4Q_R1_Guideline.pdf.

·[7] 翟云，錢(qián)思源，周恒，等.ICH M4E在中國(guó)實(shí)施的技術(shù)考慮[J].中國(guó)新藥雜志，2022,31(24):2481-2485.

·[8] ICH.Q8(R2) Pharmaceutical Development[S].2009.

·[9] ICH.Q9 Quality Risk Management[S].2005.

·[10] ICH.Q10 Fharmaceutical Quality System[S].2008.

·[11] 趙欣，李敏，羅建輝.人用狂犬病疫苗(Vero細(xì)胞)DNA殘留控制的相關(guān)探討[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2019,32(10):1164-1168.

·[12] HARADA M,MATSUU A,PARK ES,et al.Construction of Vero cell-adapted rabies vaccine strain by five amino acid substitutions in HEP-Flury strain[J].Sci Rep,2024,14(1):12559.

·[13] WHO.WHO/BS/2018.2335 International collaborative study to assess the suitability of the candidate 7 th WHO International Standard for rabies vaccine[EB/OL].(2018-10-15).https://www.who.int/publications/m/item/WHO-BS-2018.2335.

·[14] 王云鵬，曹守春，李加，等.第九批人用狂犬病疫苗國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的協(xié)作標(biāo)定[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2023,36(11):1297-1300.

·[15] 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.生物制品批簽發(fā)管理辦法(2020年12月11日國(guó)家市場(chǎng)減毒管理總局令第33號(hào)公布)[EB/OL].(2020-12-11).https://www.samr.gov.cn/zw/zfxxgk/fdzdgknr/fgs/art/2023/art_44550c0842eb4e848ec197cd5fb5f49a.html.

·[16] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心.關(guān)于發(fā)布《臨床試驗(yàn)期間生物制品藥學(xué)研究和變更技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》和《已上市疫苗藥學(xué)變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》的通告(2024年第29號(hào))[EB/OL].(2024-06-14).https://www.cde.org.cn/main/news/viewInfoCommon/e56700d8d2aaf1394610b2c47d 8c6a5c.

·[17] 金蘇，郭勝楠，邱曉，等.基于疫苗管理及技術(shù)特點(diǎn)淺析疫苗上市后變更注冊(cè)的幾點(diǎn)特殊考慮[J].中國(guó)新藥雜志，2023,32(24):2457-2462.

·[18] ZHAO TM,CAI YL,JIANG YJ,et al.Vaccine adjuvants:mechanisms and platforms[J].Signal Transduct Target Ther,2023,8(1):283.

·[19] FIRDAUS FZ,SKWARCZYNSKI M,TOTH I.Developments in vaccine adjuvants[J].Methods Mol Biol,2022,2412:145-178.

·[20] LEE W,SURESH M.Vaccine adjuvants to engage the cross-presentation pathway[J].Front Immunol,2022,13:940047.

·[21] FACCIOLà A,VISALLI G,LAGANà A,et al.An overview of vaccine adjuvants:current evidence and future perspectives[J].Vaccines (Basel),2022,10(5):819.

·[22] FANG EY,LIU XH,LI M,et al.Advances in COVID-19 mRNA vaccine development[J].Signal Transduct Target Ther,2022,7(1):94.

·[23] POLACK FP,THOMAS SJ,KITCHIN N,et al.Safety and efficacy of the BNT162b2 mRNA covid-19 vaccine[J].N Engl J Med,2020,383(27):2603-2615.

·[24] BADEN LR,EL SAHLY HM,ESSINK B,et al.Efficacy and safety of the mRNA-1273 SARS-CoV-2 vaccine[J].N Engl J Med,2021,384(5):403-416.

·[25] CHIVUKULA S,PLITNIK T,TIBBITTS T,et al.Development of multivalent mRNA vaccine candidates for seasonal or pandemic influenza[J].NPJ Vaccines,2021,6(1):153.

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