實驗中很多老師同學會遇到這些情況：

看Paper看到頭疼，但還是選不到合適的抗體

WB 跑出來干擾太多，優化很多條件還是沒得到滿意條帶

明明按照師姐的IF protocol做的，沒有信號，難道抗體出了問題？

抗體是蛋白研究最常用的工具之一，在 Western blot中揭示細胞或組織樣本中特定蛋白質的表達量的多少。用于免疫組化和免疫熒光染色，以便于在顯微鏡下可視化地觀察蛋白，以及其它各類基于抗體會與特定生物分子結合的實驗。

據估計，每年因購買質量差的抗體導致的損失達到8億美金，更不要說所造成的無數的錯誤結論、不可解釋的（或曲解）實驗，以及浪費病人樣本和增加的研究時間。瑞典皇家理工學院的研究員Mathias Uhlén表示，因抗體而造成的挫敗已經太多了，是時候做出改進了。

默克致力于為您提供可增強驗證的ZooMab?系列重組表達抗體，增強驗證是默克ZooMab?系列重組表達抗體的首要基礎，驗證其對靶標蛋白具有特異性、可重現性和高親和力。

默克ZooMab? 重組抗體

1.組分優化：純凈安全

在HEK293 細胞中重組表達，使用高度可控、低生物負載的生產工藝進行生產，最大限度減少相關的問題或風險。

同時不含抑菌劑（如疊氮化鈉）或動物來源的防腐劑（如BSA），避免可能危險物質或當地安全限制產生的復雜流程，并可用于體內和體外應用。

2.應用驗證：至少3 種

通過多重篩選獲得高親和力、高特異性的克隆，同時每種抗體至少經過3 種以上常見應用驗證，如WB，IHC，IF，ELSIA 等，一支優質抗體解決多種應用需求。

3. 工藝升級：凍干粉

獨特的凍干粉形式，儲存更便捷。提供25 UL 或4x25 UL 包裝，無需再分裝或反復凍融

(A) 使用1:100稀釋的貨號ZRB04338抗EGFR，11E19克隆ZooMAb?單克隆進行NIH/3T3細胞系免疫熒光分析，使用與Alexa Fluor?488（綠色）偶聯的山羊抗兔二抗染色。用鬼筆環肽（紅色）標記肌動蛋白絲。用DAPI（藍色）染色細胞核。該抗體可陽性染色質膜、細胞質。

增強抗體驗證

默克抗體增加除了常規驗證外，還增加了增強性驗證，確保抗體可重現性、特異性和性能的額外驗證數據。

01遺傳策略

遺傳策略 - 通過敲除/敲低方法驗證抗體特異性

預期結果：在敲除/敲除驗證實驗中，蛋白質免疫印跡（WB）條帶減少或缺失。

基因編輯CRISPR/Cas9或RNA干擾(RNAi)基因干擾方法消除或降低靶標蛋白表達，進而將此類樣品的抗體識別性能與野生型進行比較，驗證蛋白質檢測的特異性。隨后對這些降低或消除了目標蛋白表達的改造細胞樣品WB或ICC染色，評估抗體的特異性。然后將改造后的蛋白表達水平與經證表達目標蛋白的野生型樣品進行比較。

RNAi敲低遺傳驗證實例。在用對照siRNA和兩種靶標特異性siRNA探針轉染的A-549細胞中，使用抗ATRX抗體（貨號：HPA001906）進行蛋白質免疫印跡分析。siRNA樣品中的ATRX下調證實了抗體的特異性。

02 獨立抗體驗證

獨立抗體驗證 - 通過IHC或ICC，利用多種靶向同一靶標的抗體驗證抗體特異性。

預期結果：所有抗體呈現相似的染色模式或實驗結果。

在給定免疫應用中，使用針對同一靶標的其他抗體執行同一操作方案并獲得相同結果，證明使用該抗體獲得的結果的有效性。至少結合使用兩種無重疊表位的抗體和一組樣品（例如來自同一組織的切片）。這種方法可提供一種額外優勢，可在驗證的同時比較兩種抗體的結合特性。

人食道、肝、皮膚和扁桃體組織的免疫組化染色，A2ML1獨立抗體（貨號：HPA038847）(A)與（貨號：HPA038848）(B)在組織中呈現相似的蛋白分布模式。

03 RNA-Seq正交驗證

RNA-Seq正交驗證 - 通過抗體依賴性方法和非抗體依賴性方法(RNA-seq)聯用，驗證抗體特異性。

預期結果：抗體染色強度與來自同一樣本的RNA-seq數據一致。

在抗體驗證過程中，正交驗證方法指將免疫檢測結果與非抗體依賴性方法進行比較，測定目標基因或蛋白質。

RNAseq正交驗證

蛋白質免疫印跡（WB，上）和IHC（下）正交驗證。選擇已知RNA高/低表達的樣品左圖：在與RNA-seq數據（右）相關的U-251MG（VIM高表達）和MCF-7（VIM 低表達）人類細胞系中，使用抗VIM抗體（貨號：HPA001762）進行蛋白質免疫印跡分析（上）。

右圖：在與RNA-seq數據相關的人類腎臟（上，PLA2R1高表達）和胰腺組織（下，PLA2R1低表達）中，使用抗PLA2R1抗體（貨號：HPA012657）中進行免疫組織化學分析。

04 功能實驗驗證

功能實驗驗證 - 通過免疫檢測實驗誘導靶抗原表達和/或活性水平變化，驗證抗體特異性。

預期結果：通過WB、ICC、IF和FS免疫檢測改造后的抗原活性或表達水平。

通過實驗操控，可輕松體外調節許多抗原的表達和活性水平。利用常用蛋白表達或生物活性調控技術，可通過檢測目標蛋白質活性或表達水平變化確定抗體特異性。功能實驗驗證可提供有力的抗體特異性證據，是EV的重要支柱之一。

免疫熒光

在EBSS培養基中培養HeLa細胞2小時，實驗誘導HeLa細胞（A）顯示自噬體染色，而未處理細胞（B）未顯示自噬體染色。固定細胞并先后用低溫甲醇和丙酮透化，然后用5 μg/mL的兔抗LC3B（貨號 L7543，自噬體膜標記物）染色。該抗體使用山羊抗兔IgG-Cy3偶聯物開發。