摘要：呼吸道合胞病毒（RSV）是嬰幼兒和老年人嚴重呼吸道疾病的主要元兇，但現有疫苗存在免疫持久性不足的問題。本文介紹一項突破性研究：通過在 RSV 的融合蛋白（PreF）胞質尾端插入 EABR（ESCRT/ALIX 結合區域） motif，構建出能形成包膜病毒樣顆粒（eVLPs）的 PreF-EABR mRNA 疫苗。小鼠實驗顯示，該疫苗誘導的中和抗體水平更高、持續時間更長，1μg 劑量即可達到傳統疫苗 2.5μg 的保護效果，并能激活更強的生發中心 B 細胞和記憶 B 細胞反應。其核心機制在于激活toll 樣受體通路和血小板相關信號，延長抗體壽命。這項研究不僅為 RSV 疫苗研發提供了新方向，更為其他疫苗的長效化設計提供了借鑒。一、RSV 的威脅與疫苗研發的 “老大難” 問題1. RSV：嬰幼兒和老年人的 “隱形殺手”

呼吸道合胞病毒（RSV）是一種單鏈負義 RNA 病毒，看似 “普通”，卻每年導致全球近 3200 萬 5 歲以下兒童感染，其中約 6 萬人死亡。幾乎所有兒童在 2 歲前都會經歷至少一次 RSV 感染，而老年人和免疫低下人群感染后，重癥和死亡風險顯著升高。

但 RSV 的 “狡猾” 之處在于：自然感染無法誘導持久免疫保護。多數人會反復感染，這給疫苗研發帶來巨大挑戰。

2. 疫苗研發的 “前車之鑒” 與現有困境

早在 20 世紀 60 年代，首款實驗性 RSV 疫苗（福爾馬林滅活疫苗，FI-RSV）因引發疫苗增強性疾病（VED）導致接種嬰幼兒病情加重，成為疫苗研發史上的 “痛點”。此后近 50 年，RSV 疫苗進展緩慢。

直到近年，基于穩定化 PreF 蛋白（融合前構象的 F 蛋白）的疫苗才取得突破，兩款重組蛋白疫苗（Arexvy、Abrysvo）和一款 mRNA 疫苗（mRESVIA）獲批用于 60 歲以上人群，臨床試驗中對下呼吸道疾病的保護率達 83.7%。但最新數據顯示，這些疫苗的保護效力在 18 個月后降至 50%，長效性不足成為新的瓶頸。

二、技術創新：用 eVLPs 讓 mRNA 疫苗 “更持久”1. 從 “裸露抗原” 到 “包裹顆粒”：eVLPs 技術的誕生

mRNA 疫苗通過編碼病毒抗原激發免疫反應，但傳統設計中，抗原多以 “裸露” 形式存在，免疫暴露時間短，難以誘導長期記憶。

2023 年，科學家開發出EABR 技術：在病毒膜蛋白的 C 端添加 EABR motif（能結合細胞內 ESCRT 通路蛋白的區域），使其自我組裝成包膜病毒樣顆粒（eVLPs）。這種顆粒兼具細胞表面抗原展示和分泌型顆粒釋放的 “雙重特性”，可延長免疫細胞與抗原的接觸時間，增強 B 細胞反應。該技術已在新冠疫苗中驗證效果，但尚未用于 RSV 疫苗。

2. 首款 RSV eVLPs 疫苗：PreF-EABR 的設計思路

研究團隊將 EABR 技術應用于 RSV 的 PreF 蛋白：

• 截斷 PreF 的胞質尾端（CT 區域），保留關鍵氨基酸以維持膜表面表達；

• 在截斷后的 CT 區域添加 EABR motif 和內吞預防基序（EPM），前者促進 eVLPs 組裝，后者減少抗原被細胞內吞降解；

• 最終形成的PreF-EABR 蛋白既能在細胞表面表達，又能釋放到細胞外形成 eVLPs（圖 1）。

圖 1 左：PreF-EABR 的結構設計，包括信號肽（SP）、跨膜區（TM）、EABR 和 EPM 基序；右：eVLPs 的電鏡圖像及外泌體標志物檢測（CD9、CD63 等）。

三、小鼠實驗證實：PreF-EABR 疫苗的 “超能力”1. 抗體反應：滴度更高，持續更久

研究團隊給小鼠接種不同劑量（0.5μg、1μg、2.5μg）的 PreF-EABR mRNA 疫苗，并與傳統 PreF mRNA 疫苗對比，發現：

• prime 免疫后：PreF-EABR 組的 RSV 特異性 IgG 和中和抗體（針對 RSV Long 株和 B1 株）水平顯著更高，且呈劑量依賴性；

• 加強免疫后：2.5μg PreF-EABR 誘導的中和抗體滴度是傳統疫苗的 5.3 倍（Long 株）和 2.6 倍（B1 株）；

• 長期跟蹤（20 周）：兩組抗體均下降，但 PreF-EABR 組的中和抗體滴度仍顯著更高，顯示更強的持久性（圖 2）。

圖 2 左：不同時間點的 PreF 特異性 IgG 水平；中、右：針對 RSV Long 株和 B1 株的中和抗體滴度變化。

2. T 細胞反應：CD4? T 細胞增強，CD8? T 細胞減少

兩種疫苗均能誘導劑量依賴性的Th1 型細胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF-α）分泌，但存在差異：

• PreF-EABR 組的IFN-γ?CD4? T 細胞比例更高，可能與 eVLPs 通過 MHC II 類分子更高效激活輔助性 T 細胞有關；

• 傳統疫苗的IFN-γ?CD8? T 細胞比例更高，推測因 PreF-EABR 截斷了含 CD8? T 細胞表位的 CT 區域（圖 2e-j）。

給小鼠接種疫苗 4 周后，用 RSV Long 株滴鼻攻擊，結果顯示：

• 病毒載量：1μg PreF-EABR 組的肺和鼻組織病毒量與 2.5μg 傳統疫苗相當，顯著低于對照組；

• 病理損傷：PreF-EABR 組的肺泡炎、間質性肺炎等病變更輕，黏液分泌更少；

• 相關性分析：中和抗體滴度與病毒載量呈強負相關（R=-0.85），證實抗體是保護的關鍵（圖 3）。

圖 3 上：肺和鼻組織中的 RSV 載量；下：肺組織病理評分（左）和黏液染色（右）。

四、長效免疫的 “秘密武器”：更強的 B 細胞記憶與 innate 免疫激活1. 生發中心與記憶 B 細胞：免疫記憶的 “制造工廠”

長效免疫依賴生發中心（GC）B 細胞分化為記憶 B 細胞（MBCs）和長壽漿細胞（LLPCs）。實驗發現：

• PreF-EABR 組的總 GC B 細胞和F 蛋白特異性 GC B 細胞在淋巴結和脾臟中比例更高；

• 濾泡輔助性 T 細胞（Tfh）數量顯著增加，為 B 細胞提供更強輔助信號；

• 20 周后，PreF-EABR 組的F 特異性 MBCs比例仍顯著高于傳統疫苗組（圖 4）。

圖 4 左：淋巴結中 GC B 細胞比例；右：脾臟中 F 特異性記憶 B 細胞數量。

2. 分子機制： innate 免疫通路的 “全面激活”

通過對小鼠外周血單個核細胞（PBMCs）的轉錄組分析，發現 PreF-EABR 疫苗顯著激活以下通路：

• toll 樣受體（TLR）通路 ：TLR3、TLR9 等基因上調，增強抗原識別；

• 趨化因子信號：CXCL1、CCL3 等表達增加，促進免疫細胞募集；

• 血小板激活通路：Gp1ba、Itga2b 等基因上調，可能通過血小板相關信號延長抗體壽命；

• 細胞因子分泌：IL-6、TNF-α、IFN-γ 等促炎因子水平升高，強化免疫啟動（圖 5）。

圖 5 左：KEGG 富集分析顯示的關鍵通路；右：血清中細胞因子水平檢測結果。

五、意義與展望：從 RSV 到更多疫苗的 “長效化” 啟示1. 解決 RSV 疫苗的核心痛點

現有 RSV mRNA 疫苗的保護期短（18 個月降至 50%），而 PreF-EABR 疫苗通過 eVLPs 技術實現低劑量、高持久的保護，不僅降低生產成本，還可能減少副作用（如免疫過度激活），為嬰幼兒和老年人接種提供更優選擇。

2. 技術輻射：eVLPs 或成疫苗研發 “通用工具”

EABR 技術的 “雙重抗原展示” 特性（細胞表面 + 分泌顆粒）可推廣至其他病毒疫苗，如流感、HIV 等，尤其適合需要長效記憶免疫的病原體。

3. 未來挑戰

• 動物模型擴展：需在棉鼠（RSV 研究的經典模型）和非人靈長類中驗證效果；

• 臨床轉化：評估 EABR 和 EPM 基序是否引發額外免疫反應，確保安全性；

• 機制深化：需明確血小板信號如何具體調控抗體壽命，為優化設計提供依據。

這項研究通過抗原工程與eVLPs 技術的結合，首次實現了 RSV mRNA 疫苗的長效化突破，其核心價值不僅在于一款疫苗的成功，更在于為疫苗研發提供了 “增強免疫記憶” 的新范式。隨著后續研究推進，我們有望在不久的將來，看到這款疫苗從實驗室走向臨床，為全球億萬兒童和老年人筑起對抗 RSV 的 “長效防線”。

識別微信二維碼，添加生物制品圈小編，符合條件者即可加入

生物制品微信群！

請注明：姓名+研究方向！

本公眾號所有轉載文章系出于傳遞更多信息之目的，且明確注明來源和作者，不希望被轉載的媒體或個人可與我們聯系(cbplib@163.com)，我們將立即進行刪除處理。所有文章僅代表作者觀不本站。