我這 WB 結(jié)果又被審稿人懟了！說內(nèi)參和目的蛋白跑平行膠不可信……

正常，你沒看最新那篇 Nature 嗎？人家直接把內(nèi)參和目的蛋白做在同一張膜上，連編輯都點(diǎn)名夸數(shù)據(jù)扎實(shí)。

同一張膜？那怎么避免信號(hào)干擾，還能精準(zhǔn)檢測(cè)啊？

師弟連夜扒開了 Nature 高分文獻(xiàn)，終于挖到了頂刊科研人私藏的 WB「通關(guān)秘籍」！

這篇 Nature 文章通過將純化早期核內(nèi)體的交聯(lián)和天然凝膠質(zhì)譜與 AlphaFold 和計(jì)算分析相結(jié)合的研究方式，創(chuàng)建了一個(gè)系統(tǒng)的人核內(nèi)體結(jié)構(gòu)相互作用組。在這項(xiàng)解析人類早期內(nèi)體復(fù)合物結(jié)構(gòu)的重磅研究中[1]，研究團(tuán)隊(duì)通過創(chuàng)新的蛋白質(zhì)分析技術(shù)，成功繪制了內(nèi)體復(fù)合物的結(jié)構(gòu)圖譜。該研究采用 Stain-Free 免染成像技術(shù)，對(duì)早期內(nèi)體復(fù)合物的蛋白質(zhì)組成進(jìn)行了精確分析。該技術(shù)不僅能夠準(zhǔn)確鑒定復(fù)合物中的關(guān)鍵蛋白，還能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)在不同實(shí)驗(yàn)條件下的表達(dá)變化，為復(fù)合物結(jié)構(gòu)功能研究提供了可靠的數(shù)據(jù)支持。

不同于傳統(tǒng) WB 繁瑣的考馬斯亮藍(lán)染色、脫色流程，這項(xiàng)技術(shù)簡直像給蛋白條帶開了「高光特效」：電泳結(jié)束后，只需將凝膠放入 Bio-Rad 設(shè)備，通過紫外激活凝膠中的三鹵化合物，蛋白質(zhì)就能自發(fā)熒光，瞬間實(shí)現(xiàn)無染色可視化！

圖 1. Stain-Free 技術(shù)呈現(xiàn)的蛋白條帶，背景干凈，低豐度蛋白清晰可見

實(shí)驗(yàn)結(jié)果更是驚艷：

高靈敏度與高分辨率：條帶邊緣銳利清晰，相較于傳統(tǒng)染色方法，其避免了染色不均、脫色誤差等問題，極大提升了數(shù)據(jù)的重復(fù)性與定量準(zhǔn)確性。

高效精準(zhǔn)定量：避免了染色 / 脫色步驟引入的誤差，重復(fù)性高達(dá) 98%，電泳結(jié)束后僅需 1分鐘即可成像，大幅縮短實(shí)驗(yàn)周期，加速研究進(jìn)程。

非侵入性分析：無需使用染色試劑，避免了對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的潛在影響，為后續(xù)的蛋白質(zhì)鑒定和分析保留了完整性。

采用熒光 Western Blot 技術(shù)，無需繁瑣剪膜步驟，僅通過兩種熒光二抗對(duì)同一張膜進(jìn)行孵育操作，就能實(shí)現(xiàn)兩種目標(biāo)蛋白的精準(zhǔn)檢測(cè)。

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ChemiDoc Go 熒光及化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)

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ChemiDoc Go 的 Stain-Free 免染成像技術(shù)，借三鹵化合物與蛋白質(zhì)芳香族氨基酸共價(jià)結(jié)合形成熒光復(fù)合物，經(jīng) 280nm 紫外光激發(fā)產(chǎn)生與蛋白濃度線性相關(guān)的熒光信號(hào)，通過高精度檢測(cè)模塊實(shí)現(xiàn)無染可視化與定量。

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注：

1. 相關(guān)產(chǎn)品僅限科研使用，不作為臨床診斷。

2. Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories，Inc. 在特定區(qū)域的商標(biāo)。

3. 本活動(dòng)的最終解釋權(quán)歸伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司。

內(nèi)容策劃：潘成

內(nèi)容審核：周育紅

題圖來源：圖蟲創(chuàng)意

參考文獻(xiàn)

[1] Gonzalez-Lozano, M.A., Schmid, E.W., Miguel Whelan, E. et al. EndoMAP.v1 charts the structural landscape of human early endosome complexes. Nature (2025). https://doi.org/10.1038/s41586-025-09059-y